| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩写词表 | 第20-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-44页 |
| 1.1 研究背景 | 第22-23页 |
| 1.2 研究现状 | 第23-30页 |
| 1.2.1 乙脑病毒的生物学特征 | 第23-24页 |
| 1.2.2 乙脑病毒的增殖 | 第24-25页 |
| 1.2.3 乙脑病毒的理化特征 | 第25页 |
| 1.2.4 乙脑病毒的结构及功能 | 第25-27页 |
| 1.2.5 乙脑病毒的细胞培养 | 第27页 |
| 1.2.6 乙脑病毒的传播途径 | 第27-28页 |
| 1.2.7 致病性及临床症状 | 第28-29页 |
| 1.2.8 乙脑病毒的检测方法 | 第29页 |
| 1.2.9 乙型脑炎的预防和治疗 | 第29-30页 |
| 1.3 单克隆抗体技术及其在乙型脑炎病毒研究中的应用 | 第30-38页 |
| 1.3.1 单克隆抗体的技术理论 | 第30-31页 |
| 1.3.2 抗原简介 | 第31页 |
| 1.3.3 抗原的制备 | 第31-32页 |
| 1.3.4 抗体简介 | 第32-34页 |
| 1.3.5 抗原抗体反应 | 第34-35页 |
| 1.3.6 抗体的制备 | 第35-37页 |
| 1.3.7 单克隆抗体在乙型脑炎病毒研究中的应用 | 第37-38页 |
| 1.4 病毒受体陷阱技术、Fc融合蛋白及Vimentin研究 | 第38-41页 |
| 1.4.1 病毒受体陷阱技术 | 第38页 |
| 1.4.2 Fc融合蛋白 | 第38-39页 |
| 1.4.3 波形蛋白(vimentin)及其功能 | 第39-41页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第41-43页 |
| 1.6 实验技术路线图 | 第43-44页 |
| 第二章 抗JEV单克隆抗体的制备及初步鉴定 | 第44-81页 |
| 2.1 实验材料 | 第45-52页 |
| 2.1.1 菌种、质粒、细胞与实验动物 | 第45页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第45-46页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第46-49页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第49-52页 |
| 2.2 试验方法 | 第52-67页 |
| 2.2.1 NA细胞的培养及病毒接种 | 第52-53页 |
| 2.2.2 动物免疫 | 第53-54页 |
| 2.2.3 ELISA方法测定小鼠多抗血清效价 | 第54-55页 |
| 2.2.4 细胞融合 | 第55-57页 |
| 2.2.5 杂交瘤细胞的亚克隆(有限稀释法) | 第57页 |
| 2.2.6 杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第57页 |
| 2.2.7 JEV单克隆抗体的亚型鉴定 | 第57-58页 |
| 2.2.8 JEV单克隆抗体腹水制备及其抗体效价测定 | 第58页 |
| 2.2.9 乙型脑炎病毒基因组RNA的提取 | 第58-59页 |
| 2.2.10 JEV-NS1基因引物设计与合成 | 第59-60页 |
| 2.2.11 重组质粒的构建与提取 | 第60-61页 |
| 2.2.12 重组质粒pET-32a-NS1转化进E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞 | 第61-62页 |
| 2.2.13 重组蛋白的诱导表达 | 第62页 |
| 2.2.14 SDS-PAGE电泳 | 第62-63页 |
| 2.2.15 重组蛋白的大量表达 | 第63页 |
| 2.2.16 重组蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| 2.2.17 蛋白浓度的测定 | 第64-65页 |
| 2.2.18 重组蛋白的Western Blot分析 | 第65页 |
| 2.2.19 间接免疫荧光验证单抗与JEV蛋白的特异性 | 第65-66页 |
| 2.2.20 Western-Blot鉴定单抗对病毒编码蛋白的反应性 | 第66-67页 |
| 2.2.21 单克隆抗体稳定性鉴定 | 第67页 |
| 2.3 实验结果 | 第67-77页 |
| 2.3.1 小鼠免疫效价的检测 | 第67页 |
| 2.3.2 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第67-68页 |
| 2.3.3 单克隆抗体腹水效价测定 | 第68-69页 |
| 2.3.4 重组质粒pET-32a-NS1的构建 | 第69-70页 |
| 2.3.5 表达产物SDS-PAGE电泳分析 | 第70-71页 |
| 2.3.6 重组蛋白的纯化 | 第71-72页 |
| 2.3.7 重组蛋白的浓度测定 | 第72-73页 |
| 2.3.8 NS1蛋白的Western-Blot验证 | 第73-74页 |
| 2.3.9 IFA分析单克隆抗体对JEV感染细胞的识别情况 | 第74-76页 |
| 2.3.10 三株单抗的Western-Blot验证结果 | 第76-77页 |
| 2.3.11 重组蛋白单克隆抗体稳定性的分析 | 第77页 |
| 2.4 讨论 | 第77-80页 |
| 2.5 本章小结 | 第80-81页 |
| 第三章 Vimentin-Fc融合蛋白的表达及其对JEV病毒的抗病毒效果的研究 | 第81-107页 |
| 3.1 实验材料 | 第81-85页 |
| 3.1.1 菌株载体与酶类 | 第81页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第81-82页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第82-85页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第85页 |
| 3.2 试验方法 | 第85-94页 |
| 3.2.1 小鼠淋巴细胞的提取 | 第85页 |
| 3.2.2 小鼠淋巴细胞RNA的提取 | 第85-86页 |
| 3.2.3 Vimentin基因与Fc基因引物设计与Vimentin-Fc融合基因的合成 | 第86-87页 |
| 3.2.4 重组质粒的构建与提取 | 第87-89页 |
| 3.2.5 Vimentin-Fc重组蛋白的诱导表达 | 第89页 |
| 3.2.6 SDS-PAGE电泳验证 | 第89页 |
| 3.2.7 重组蛋白的大量表达 | 第89页 |
| 3.2.8 重组蛋白的纯化 | 第89页 |
| 3.2.9 蛋白浓度的测定 | 第89页 |
| 3.2.10 重组蛋白的Western Blot分析 | 第89-90页 |
| 3.2.11 重组蛋白的复性及除菌 | 第90-91页 |
| 3.2.12 病毒培养及免疫荧光鉴定 | 第91页 |
| 3.2.13 Pull-down试验 | 第91-92页 |
| 3.2.14 荧光定量试验 | 第92-94页 |
| 3.3 实验结果 | 第94-104页 |
| 3.3.1 Vimentin与Fc基因片段的融合及Vimentin-Fc载体的构建 | 第94-96页 |
| 3.3.2 Vimentin-Fc载体构建 | 第96-97页 |
| 3.3.3 重组质粒双酶切鉴定 | 第97-98页 |
| 3.3.4 重组蛋白的表达 | 第98-99页 |
| 3.3.5 重组蛋白的纯化 | 第99-100页 |
| 3.3.6 目的蛋白的Western-Blot验证结果 | 第100-101页 |
| 3.3.7 病毒培养及免疫荧光鉴定 | 第101-102页 |
| 3.3.8 Pull-down实验 | 第102-103页 |
| 3.3.9 荧光定量试验 | 第103-104页 |
| 3.4 讨论 | 第104-106页 |
| 3.5 本章小结 | 第106-107页 |
| 第四章 全文总结 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-116页 |
| 附录 A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第116页 |
