| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-22页 |
| 1.1 GnIH的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.1.1 GnIH生物学概述 | 第16页 |
| 1.1.2 GnIH的序列及命名 | 第16页 |
| 1.1.3 GnIH的分布及含量 | 第16-17页 |
| 1.1.4 国内外研究现状 | 第17-19页 |
| 1.2 基因免疫技术在哺乳动物繁殖功能的调控中的研究及应用 | 第19-20页 |
| 1.3 酶联免疫吸附试验技术 | 第20-21页 |
| 1.3.1 ELISA方法的基本原理 | 第20页 |
| 1.3.2 ELISA方法的分类 | 第20-21页 |
| 1.3.3 新型ELISA检测方法 | 第21页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 GnIH抗体间接ELISA检测方法的建立及优化 | 第22-31页 |
| 2.1 材料及仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.1 材料及试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.3 主要溶液 | 第22页 |
| 2.2 实验步骤及方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 各组分最适浓度优化 | 第22-24页 |
| 2.2.2 数据处理 | 第24页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第24-27页 |
| 2.3.1 最佳包被浓度以及血清最佳稀释倍数的确定 | 第24-25页 |
| 2.3.2 最适封闭液选择 | 第25页 |
| 2.3.3 最适酶标抗体浓度的确定 | 第25-26页 |
| 2.3.4 最适样品反应时间的确定 | 第26页 |
| 2.3.5 酶标抗体最佳作用时间优化 | 第26-27页 |
| 2.3.6 最佳显色时间优化 | 第27页 |
| 2.4 建立的间接ELISA检测法的评价 | 第27-29页 |
| 2.4.1 特异性分析 | 第27-28页 |
| 2.4.2 重复性分析 | 第28页 |
| 2.4.3 GnIH抗体的测定 | 第28-29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-30页 |
| 2.6 小结 | 第30-31页 |
| 第三章 GnIH-INH-Follistatin融合抗原表位的克隆及表达 | 第31-40页 |
| 3.1 材料及仪器设备 | 第31页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第31页 |
| 3.2 实验步骤及方法 | 第31-35页 |
| 3.2.1 GnIH-INH-Follistatin与INH | 第31-32页 |
| 3.2.2 GnIH-INH-Follistatin与INH基因的克隆 | 第32-33页 |
| 3.2.3 Pbluescript sk(+)-C3d、Pbluescript sk(+)-2(C3d)、Pbluescript sk(+)-3(C3d)质粒双酶切、连接及转化 | 第33页 |
| 3.2.4 重组表达载体pET28a-GnIH-INH-Follistatin-3(C3d)、pET28a-INH-3(C3d)的构建 | 第33-34页 |
| 3.2.5 IPTG诱导表达及鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第35-38页 |
| 3.3.1 GnIH-INH-Follistatin基因的克隆 | 第35-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 第四章 Gn IH-INH-Follistatin融合基因疫苗的构建 | 第40-47页 |
| 4.1 材料及仪器设备 | 第40页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第40页 |
| 4.2 实验步骤及方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第40-41页 |
| 4.2.2 构建重组表达载体Psec-tag2a-Gn IH-INH-Follistatin-3(C3d) | 第41-42页 |
| 4.2.3 重组质粒Psec-tag2a-GnIH-INH-Follistatin、Psec-tag2a-3(C3d)的鉴定 | 第42页 |
| 4.2.4 构建重组质粒Psec-tag2a-GnIH-INH-Follistatin -3(C3d) | 第42-43页 |
| 4.2.5 重组质粒Psec-tag2a- GnIH-INH-Follistatin-3(C3d)的鉴定 | 第43页 |
| 4.2.6 重组质粒Psec-tag2a- GnIH-INH-Follistatin-3(C3d)的保存 | 第43页 |
| 4.2.7 质粒Psec-tag2a-GnIH-INH-Follistatin-3(C3d)转染试验 | 第43页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第43-45页 |
| 4.3.1 Psec-tag2a、Psec-tag2a-3(C3d)质粒电泳图 | 第43页 |
| 4.3.2 Psec-tag2a-3(C3d)质粒双酶切 | 第43-44页 |
| 4.3.3 GnIH、INH融合基因的PCR扩增 | 第44页 |
| 4.3.4 Psec-tag2a-GnIH-INH-Follistatin-3(C3d)质粒的PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.5 Psec-tag2a-GnIH-INH-Follistatin-3(C3d)质粒转染 | 第45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-46页 |
| 4.5 小结 | 第46-47页 |
| 第五章 GnIH-INH-Follistati融合基因疫苗主动免疫对绵羊生殖激素的影响 | 第47-52页 |
| 5.1 材料及仪器设备 | 第47页 |
| 5.1.1 主要材料 | 第47页 |
| 5.1.2 主要试剂与仪器 | 第47页 |
| 5.2 实验步骤及方法 | 第47-48页 |
| 5.2.1 抗血清的制备 | 第47页 |
| 5.2.2 抗体检测程序 | 第47-48页 |
| 5.2.3 FSH及LH的检测步骤 | 第48页 |
| 5.2.4 数据分析 | 第48页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第48-50页 |
| 5.3.1 试验组与对照组抗体的变化 | 第48-49页 |
| 5.3.2 GnIH-INH-Follistati融合基因疫苗对生殖激素的影响 | 第49-50页 |
| 5.4 讨论 | 第50-51页 |
| 5.5 小结 | 第51-52页 |
| 第六章 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61页 |
