| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第9-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-25页 |
| 1.1 引言 | 第15-16页 |
| 1.2 纳米HAp颗粒的生物安全性 | 第16-17页 |
| 1.3 纳米HAp作为基因载体的研究 | 第17-19页 |
| 1.3.1 纳米HAp作为基因载体的优势 | 第17页 |
| 1.3.2 纳米HAp与基因结合的方式 | 第17页 |
| 1.3.3 纳米HAp转染效率的研究 | 第17-19页 |
| 1.4 乳腺癌与基因治疗 | 第19-21页 |
| 1.4.1 乳腺癌及其发病机制 | 第19-20页 |
| 1.4.2 乳腺癌的基因治疗 | 第20-21页 |
| 1.5 Nodal信号和Lefty蛋白 | 第21-23页 |
| 1.5.1 Nodal信号通路 | 第21页 |
| 1.5.2 乳腺癌与Nodal信号 | 第21-22页 |
| 1.5.3 Lefty蛋白和Nodal信号 | 第22页 |
| 1.5.4 Lefty蛋白的抗肿瘤活性研究 | 第22-23页 |
| 1.6 本课题研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 纳米羟基磷灰石颗粒的制备 | 第25-34页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.1 主要实验材料 | 第25页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.3 主要溶液配制方法 | 第26页 |
| 2.3 纳米HAp颗粒的合成 | 第26-27页 |
| 2.3.1 棒状颗粒的合成 | 第26页 |
| 2.3.2 长梭状颗粒的合成 | 第26-27页 |
| 2.3.3 球形颗粒的合成 | 第27页 |
| 2.4 纳米HAp颗粒的表征 | 第27-28页 |
| 2.4.1 场发射扫描电镜（FE-SEM） | 第27-28页 |
| 2.4.2 X射线粉末衍射仪（XRD） | 第28页 |
| 2.4.3 红外吸收光谱仪（FT-IR） | 第28页 |
| 2.4.4 热重分析仪（TGA） | 第28页 |
| 2.4.5 粒径分布（DLS） | 第28页 |
| 2.5 结果与分析 | 第28-33页 |
| 2.5.1 D-HAp颗粒的表征结果 | 第28-30页 |
| 2.5.2 P-HAp颗粒的表征结果 | 第30-31页 |
| 2.5.3 S-HAp颗粒的表征结果 | 第31-33页 |
| 2.6 本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 纳米HAp颗粒体外降解实验 | 第34-42页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 主要实验材料和仪器 | 第34-35页 |
| 3.2.1 主要实验材料 | 第34页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第34页 |
| 3.2.3 主要溶液配制方法 | 第34-35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35页 |
| 3.3.1 不同pH值纳米HAp悬液制备 | 第35页 |
| 3.3.2 钙离子浓度标准曲线测定方法 | 第35页 |
| 3.3.3 钙离子浓度测定方法 | 第35页 |
| 3.3.4 HAp颗粒降解后表征测试 | 第35页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第35-41页 |
| 3.4.1 钙离子浓度标准曲线 | 第35-36页 |
| 3.4.2 钙离子浓度累积变化曲线 | 第36-37页 |
| 3.4.3 HAp颗粒体外累积降解百分比变化曲线 | 第37-38页 |
| 3.4.4 降解后HAp颗粒的表征结果 | 第38-41页 |
| 3.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 纳米HAp-pEGFP-C1-lefty-1 复合物制备 | 第42-51页 |
| 4.1 引言 | 第42页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第42-43页 |
| 4.2.1 实验主要材料 | 第42页 |
| 4.2.2 实验主要仪器 | 第42-43页 |
| 4.2.3 细胞株 | 第43页 |
| 4.2.4 实验主要溶液配制方法 | 第43页 |
| 4.3 实验步骤 | 第43-46页 |
| 4.3.1 pEGFP-C1-lefty-1 质粒的合成 | 第43页 |
| 4.3.2 pEGFP-C1-lefty-1 序列测定 | 第43-44页 |
| 4.3.3 质粒小抽 | 第44页 |
| 4.3.4 质粒大抽 | 第44-45页 |
| 4.3.5 pEGFP-C1-lefty-1 质粒的酶切鉴定 | 第45页 |
| 4.3.6 HAp-pEGFP-C1-lefty-1 复合物的制备与负载曲线 | 第45页 |
| 4.3.7 HAp-pEGFP-C1-lefty-1 的基因释放曲线 | 第45页 |
| 4.3.8 HAp-pEGFP-C1体外转染细胞 | 第45-46页 |
| 4.4 实验与讨论 | 第46-50页 |
| 4.4.1 酶切鉴定和测序结果 | 第46-47页 |
| 4.4.2 纳米HAp颗粒与pEGFP-C1-lefty-1 质粒体外负载曲线 | 第47页 |
| 4.4.3 HAp-pEGFP-C1-lefty-1 体外基因释放曲线 | 第47-48页 |
| 4.4.4 HAp-pEGFP-C1的体外转染实验 | 第48-50页 |
| 4.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第五章 细胞摄取纳米HAp颗粒的研究 | 第51-59页 |
| 5.1 引言 | 第51页 |
| 5.2 主要实验材料和仪器 | 第51-53页 |
| 5.2.1 主要实验材料 | 第51-52页 |
| 5.2.2 主要实验仪器 | 第52页 |
| 5.2.3 细胞株 | 第52页 |
| 5.2.4 主要试剂溶液配制 | 第52-53页 |
| 5.3 FITC-罗丹明-鬼笔环肽染色法 | 第53-54页 |
| 5.3.1 FITC与颗粒的复合 | 第53页 |
| 5.3.2 纳米HAp颗粒摄取实验 | 第53页 |
| 5.3.3 罗丹明-鬼笔环肽荧光染色 | 第53-54页 |
| 5.4 TEM观察细胞摄取纳米HAp颗粒 | 第54页 |
| 5.4.1 细胞样品制备 | 第54页 |
| 5.4.2 TEM细胞样品制备 | 第54页 |
| 5.5 结果与讨论 | 第54-58页 |
| 5.5.1 FITC-罗丹明-鬼笔环肽染色 | 第54-55页 |
| 5.5.2 细胞摄取HAp颗粒TEM结果 | 第55-58页 |
| 5.6 本章小结 | 第58-59页 |
| 第六章 纳米HAp携载lefty-1 基因对乳腺癌细胞的杀伤效应 | 第59-74页 |
| 6.1 引言 | 第59页 |
| 6.2 主要实验材料和仪器 | 第59-61页 |
| 6.2.1 主要实验材料 | 第59-60页 |
| 6.2.2 主要实验仪器 | 第60页 |
| 6.2.3 细胞株 | 第60页 |
| 6.2.4 主要溶液配制方法 | 第60-61页 |
| 6.3 实验方法 | 第61-64页 |
| 6.3.1 细胞培养和传代 | 第61页 |
| 6.3.2 细胞冻存和细胞复苏 | 第61-62页 |
| 6.3.3 细胞铺板 | 第62页 |
| 6.3.4 LDH法检测颗粒对细胞膜完整性的影响 | 第62-63页 |
| 6.3.5 MTT法检测颗粒的细胞毒性 | 第63页 |
| 6.3.6 MTT法检测lefty-1 对乳腺细胞的杀伤效果 | 第63页 |
| 6.3.7 钙离子对乳腺癌细胞杀伤效应的研究 | 第63-64页 |
| 6.3.8 Hocehst染色法观察细胞凋亡 | 第64页 |
| 6.3.9 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第64页 |
| 6.3.10 数据分析 | 第64页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第64-73页 |
| 6.4.1 LDH法检测细胞膜的完整性 | 第64-66页 |
| 6.4.2 MTT细胞毒性实验结果 | 第66-67页 |
| 6.4.3 MTT法检测lefty-1 基因对人乳腺癌细胞的杀伤效果 | 第67-68页 |
| 6.4.4 钙离子对人乳腺癌细胞杀伤效应的研究 | 第68-69页 |
| 6.4.5 Hocehst染色结果 | 第69-71页 |
| 6.4.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第71-73页 |
| 6.5 本章小结 | 第73-74页 |
| 第七章 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 硕士期间研究成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
