| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-19页 |
| 1 孕激素和甲状腺疾病关系的研究现状 | 第13-14页 |
| 2 孕激素污染源的来源 | 第14-15页 |
| 3 孕激素对动物和人类健康的影响 | 第15-16页 |
| 3.1 在动物界中环境孕激素对其产生的危害 | 第15页 |
| 3.2 环境孕激素对人类健康的影响 | 第15-16页 |
| 4 目前国内外建立的激素检测方法 | 第16-19页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第19-22页 |
| 1 实验目的、意义 | 第19页 |
| 2 实验内容 | 第19-21页 |
| 3 实验流程图 | 第21-22页 |
| 第三章 孕激素受体（PR）及其受体应答元件（PRE）基因克隆及其重组质粒构建 | 第22-31页 |
| 1 材料与试剂 | 第22-23页 |
| 1.1 菌种 | 第22页 |
| 1.2 试剂 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-28页 |
| 2.1 孕激素受体基因hPR的克隆 | 第23-24页 |
| 2.2 含有孕激素受体基因hPR的重组质粒的构建 | 第24-26页 |
| 2.3 含有不同串联孕激素受体反应元件PRE片段的重组载体的构建 | 第26-28页 |
| 3 实验结果 | 第28-30页 |
| 3.1 pEGFP-N2-hPR、pIRES2-EGFP-hPR重组质粒的鉴定 | 第28-30页 |
| 3.2 重组质粒pGL4-PRE4/6/8 的鉴定 | 第30页 |
| 4 讨论 | 第30-31页 |
| 第四章 稳转细胞株的构建 | 第31-42页 |
| 1 材料与试剂 | 第31-32页 |
| 1.1 细胞株 | 第31页 |
| 1.2 试剂 | 第31页 |
| 1.3 试剂配制 | 第31-32页 |
| 1.4 去除激素的FBS（CT-FBS）配制 | 第32页 |
| 1.5 细胞免疫荧光技术的主要试剂配制 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-38页 |
| 2.1 去内毒素质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.2 HeLa细胞复苏、传代培养 | 第33-34页 |
| 2.3 MTT实验 | 第34-35页 |
| 2.4 分别考查不同载体和PRE的不同倍数串联片段的萤光素酶活性 | 第35-36页 |
| 2.5 稳转细胞株的构建 | 第36-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-41页 |
| 3.1 抗生素G418和HyB的MTT实验结果分析 | 第38页 |
| 3.2 不同载体和不同串联倍数的反应元件片段的萤光素酶活性考查的结果 | 第38-40页 |
| 3.3 单克隆细胞株的构建结果及细胞形态学鉴定结果 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第五章 单克隆细胞株的鉴定及应用 | 第42-58页 |
| 1 序言 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-49页 |
| 2.1 分子水平鉴定 | 第42-46页 |
| 2.2 蛋白水平鉴定 | 第46页 |
| 2.3 稳转细胞株hPRLuc稳定性和萤光素酶活性检测 | 第46-47页 |
| 2.4 孕激素受体稳转细胞株即hPRLuc的特异性检测 | 第47-48页 |
| 2.5 稳转细胞株在临床血清样本中孕激素检测的应用 | 第48-49页 |
| 3 实验结果 | 第49-56页 |
| 3.1 分子水平上验证目的基因hPR和luc的电泳结果 | 第49-50页 |
| 3.2 细胞免疫荧光技术检测孕激素受体蛋白的实验结果 | 第50-51页 |
| 3.3 细胞株hPRLuc稳定性及萤光素酶活性检测的结果 | 第51-52页 |
| 3.4 孕激素稳转细胞株的特异性分析 | 第52-53页 |
| 3.5 血样中孕激素水平检测结果 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
