| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第8-11页 |
| 1.1 真核表达系统的优势 | 第8页 |
| 1.2 真核表达系统国内外研究现状 | 第8-9页 |
| 1.2.1 七鳃鳗功能基因在哺乳动物细胞中表达的研究现状 | 第8-9页 |
| 1.2.2 哺乳动物功能基因表达的研究现状 | 第9页 |
| 1.3 本课题研究意义 | 第9-11页 |
| 2 表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-LIP的构建及鉴定 | 第11-22页 |
| 2.1 实验材料 | 第11页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第11页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第11页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第11页 |
| 2.2 实验方法 | 第11-16页 |
| 2.2.1 表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-LIP的构建 | 第11-14页 |
| 2.2.2 pIRES2-AcGFP1-Nuc-LIP质粒转染H293T及HeLa细胞 | 第14页 |
| 2.2.3 真核重组LIP的鉴定 | 第14-15页 |
| 2.2.4 真核重组LIP对细胞活力的影响 | 第15-16页 |
| 2.3 实验结果 | 第16-20页 |
| 2.3.1 表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-LIP的构建 | 第16页 |
| 2.3.2 pIRES2-AcGFP1-Nuc-LIP 质粒以及空载质粒转染 H293T 及 HeLa 细胞 | 第16-17页 |
| 2.3.3 真核重组 LIP 的鉴定 | 第17页 |
| 2.3.4 真核重组 LIP 对细胞活力的影响 | 第17-20页 |
| 2.4 讨论 | 第20-22页 |
| 3 过表达LIP对细胞活力的影响 | 第22-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第22页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第22页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 3.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 3.2.1 细胞内质网染色 | 第22-23页 |
| 3.2.2 细胞线粒体染色 | 第23页 |
| 3.2.3 细胞凋亡情况检测 | 第23页 |
| 3.2.4 细胞内氧化还原水平变化情况检测 | 第23页 |
| 3.2.5 细胞周期检测 | 第23-24页 |
| 3.2.6 基因芯片分析 | 第24页 |
| 3.2.7 基因芯片结果的验证 | 第24-25页 |
| 3.3 实验结果 | 第25-34页 |
| 3.3.1 真核重组 LIP 对两种转染细胞内质网以及线粒体的影响 | 第25-26页 |
| 3.3.2 真核重组LIP对两种转染细胞凋亡情况的影响 | 第26-27页 |
| 3.3.3 真核重组LIP对两种转染细胞内氧化还原水平的影响 | 第27页 |
| 3.3.4 细胞周期分析结果 | 第27页 |
| 3.3.5 基因芯片结果、分析以及验证 | 第27-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-39页 |
| 4 真核重组LIP的功能鉴定 | 第39-49页 |
| 4.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第39页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第39-40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 表达质粒pEGFP-N1-LIP的构建 | 第40-42页 |
| 4.2.2 真核重组LIP对MCF-7 细胞的杀伤作用 | 第42页 |
| 4.2.3 LIP-GFP融合质粒的细胞转染及鉴定 | 第42页 |
| 4.2.4 真核重组LIP的细胞定位 | 第42-43页 |
| 4.2.5 真核重组LIP的分泌功能探究 | 第43页 |
| 4.3 实验结果 | 第43-47页 |
| 4.3.1 真核重组LIP对MCF-7 细胞的杀伤作用 | 第43-44页 |
| 4.3.2 表达质粒pEGFP-N1-LIP的构建 | 第44-45页 |
| 4.3.3 LIP-GFP融合质粒的细胞转染及鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3.4 真核重组LIP的细胞定位 | 第46页 |
| 4.3.5 真核重组LIP的分泌功能探究 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-49页 |
| 5 讨论 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
