| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| ·黄曲霉毒素的结构及理化性质 | 第9-10页 |
| ·黄曲霉毒素的发现 | 第9页 |
| ·黄曲霉毒素的结构与理化性质 | 第9-10页 |
| ·黄曲霉毒素的危害及其限量标准 | 第10-11页 |
| ·黄曲霉毒素对人类、动物的危害 | 第10页 |
| ·黄曲霉毒素的限量标准 | 第10-11页 |
| ·黄曲霉毒素的检测方法 | 第11-12页 |
| ·薄层层析法（TLC） | 第11页 |
| ·高效液相色谱法（HPLC） | 第11-12页 |
| ·酶联免疫法（ELISA） | 第12页 |
| ·黄曲霉毒素去除法的研究进展 | 第12-14页 |
| ·物理法 | 第12-13页 |
| ·化学法 | 第13页 |
| ·生物学方法 | 第13-14页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第14-15页 |
| ·研究意义 | 第14页 |
| ·研究目的 | 第14-15页 |
| 2 黄曲霉毒素解毒酶基因的克隆 | 第15-27页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·菌种与载体 | 第15页 |
| ·酶、试剂与试剂盒 | 第15页 |
| ·常用仪器 | 第15页 |
| ·培养基的配制 | 第15页 |
| ·提取RNA 用溶液 | 第15-16页 |
| ·碱裂解法抽提质粒溶液 | 第16页 |
| ·核酸电泳用溶液 | 第16页 |
| ·其他溶液 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-22页 |
| ·假蜜环菌总RNA 的提取 | 第16-17页 |
| ·1%琼脂糖凝胶电泳检测 | 第17页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第17-18页 |
| ·PCR 扩增目的基因片断 | 第18-19页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳验证PCR 产物 | 第19页 |
| ·目的基因片段的回收 | 第19-20页 |
| ·目的片段与PMD-T-18 载体连接 | 第20页 |
| ·E.coli TOP10 感受态细胞的制备 | 第20页 |
| ·转化大肠杆菌TOP10 | 第20-21页 |
| ·SDS 碱裂法小量制备质粒 DNA | 第21页 |
| ·重组单克隆的PCR 验证 | 第21-22页 |
| ·结果与分析 | 第22-27页 |
| ·RNA 的提取 | 第22页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第22-23页 |
| ·TOP10-T-ADTZ 测序结果 | 第23-25页 |
| ·黄曲霉毒素解毒酶基因一级结构分析 | 第25-27页 |
| 3 黄曲霉毒素解毒酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第27-43页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·菌株及载体 | 第27页 |
| ·酶、试剂与试剂盒 | 第27页 |
| ·培养基的配制 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE 用溶液的配制 | 第27-28页 |
| ·蛋白纯化用溶液 | 第28-29页 |
| ·Western blot 用溶液 | 第29页 |
| ·其他溶液 | 第29页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-36页 |
| ·克隆载体PMD-T-ADTZ 双酶切与目的片段的回收 | 第29页 |
| ·pET-30a 载体双酶切 | 第29-30页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·转化大肠杆菌TOP10 | 第30页 |
| ·重组表达载体的PCR 鉴定与双酶切鉴定 | 第30页 |
| ·重组表达菌株的构建 | 第30-31页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第31页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第31-32页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白 | 第32-33页 |
| ·重组酶表达条件的优化 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| ·蛋白定量 | 第35页 |
| ·重组酶的活性测定 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-43页 |
| ·重组表达载体 pET-30a-ADTZ 的构建与重组载体的双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组菌诱导表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第37-38页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白 | 第38页 |
| ·表达条件的优化 | 第38-40页 |
| ·Bradford 法蛋白定量 | 第40-41页 |
| ·酶活性检测 | 第41-43页 |
| 4 黄曲霉毒素解毒酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第43-55页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株及载体 | 第43页 |
| ·化学试剂和试剂盒 | 第43页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第43-44页 |
| ·溶液的配制 | 第44页 |
| ·实验仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-49页 |
| ·克隆载体PMD-T-ADTZ 双酶切与目的片段的回收 | 第44页 |
| ·表达载体 pPic9K-6HisEn-5’双酶切 | 第44-45页 |
| ·表达载体的构建与转化大肠杆菌TOP10 | 第45页 |
| ·重组菌的PCR 鉴定与质粒双酶切鉴定 | 第45页 |
| ·质粒DNA 大量提取 | 第45页 |
| ·重组质粒线性化 | 第45-46页 |
| ·重组表达菌株的构建 | 第46页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选 | 第46-47页 |
| ·目的基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白 | 第48页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第48页 |
| ·Bradford 法蛋白定量 | 第48页 |
| ·黄曲霉毒素解毒酶的活性检测 | 第48-49页 |
| ·结果分析 | 第49-55页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第49页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·甲醇利用表型的确定 | 第50页 |
| ·重组酵母基因组PCR 鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组酵母诱导表达产物SDS-PAGE 分析 | 第51-52页 |
| ·重组酵母表达产物随时间变化的SDS-PAGE 分析 | 第52页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白 | 第52-53页 |
| ·蛋白定量 | 第53-54页 |
| ·酶活性分析 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-56页 |
| ·表达系统 | 第55页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第55页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第55页 |
| ·小结 | 第55页 |
| ·酶比活力 | 第55-56页 |
| 6 结论与展望 | 第56-58页 |
| ·结论 | 第56页 |
| ·创新点 | 第56页 |
| ·展望 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
