| 摘要 | 第9-12页 |
| Abastract | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-34页 |
| 1 猪瘟简介 | 第16-17页 |
| 2 猪瘟感染的临床症状 | 第17-18页 |
| 3 猪瘟病毒分子生物学特性 | 第18-25页 |
| 3.1 猪瘟病毒基因组结构 | 第18-19页 |
| 3.2 不同病毒蛋白的结构和功能 | 第19-25页 |
| 3.2.1 Npro蛋白 | 第19-20页 |
| 3.2.2 核衣壳蛋白Core | 第20页 |
| 3.2.3 Erns蛋白 | 第20-21页 |
| 3.2.4 E1蛋白 | 第21页 |
| 3.2.5 E2蛋白 | 第21-22页 |
| 3.2.6 p7蛋白 | 第22-23页 |
| 3.2.7 NS2/3复合体及NS2蛋白和NS3蛋白单体 | 第23-24页 |
| 3.2.8 NS4A与NS4B蛋白 | 第24页 |
| 3.2.9 NS5A蛋白 | 第24-25页 |
| 3.2.10 NS5B蛋白 | 第25页 |
| 4 猪瘟病毒的分型及分子流行病学研究 | 第25-26页 |
| 5 猪瘟病毒的细胞培养与复制 | 第26-28页 |
| 5.1 培养特性 | 第26页 |
| 5.2 猪瘟病毒的复制 | 第26-27页 |
| 5.3 非结构蛋白在猪瘟复制中的作用 | 第27-28页 |
| 6 反向遗传操作系统与猪瘟病毒研究 | 第28-31页 |
| 6.1 反向遗传操作系统与感染性克隆 | 第28-29页 |
| 6.2 猪瘟病毒感染性克隆研究进展 | 第29-31页 |
| 7 猪瘟兔化弱毒疫苗C株概述 | 第31-32页 |
| 7.1 弱毒疫苗及C株疫苗免疫特点 | 第31-32页 |
| 7.2 C株疫苗生产方法 | 第32页 |
| 8 本研究的目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二部分 试验研究 | 第34-108页 |
| 第一章 猪瘟病毒C株与石门毒株体外生长特性比较 | 第35-47页 |
| 摘要 | 第35-36页 |
| 1 材料与方法 | 第36-39页 |
| 1.1 材料 | 第36-37页 |
| 1.1.1 细胞和病毒 | 第36页 |
| 1.1.2 质粒、抗体及试剂 | 第36-37页 |
| 1.2 方法 | 第37-39页 |
| 1.2.1 病毒的体外培养 | 第37页 |
| 1.2.2 病毒细胞半数感染量(TCID_(50))测定 | 第37页 |
| 1.2.3 间接免疫荧光检测方法(IFA) | 第37页 |
| 1.2.4 过氧化物免疫组织染色方法 | 第37-38页 |
| 1.2.5 病毒体外生长曲线的测定 | 第38页 |
| 1.2.6 荧光定量PCR方法测定细胞内病毒基因组拷贝数 | 第38-39页 |
| 1.2.6.1 感染细胞总RNA的抽提 | 第38页 |
| 1.2.6.2 cDNA样品的合成 | 第38-39页 |
| 1.2.6.3 荧光定量PCR | 第39页 |
| 2 结果 | 第39-45页 |
| 2.1 重组C株病毒与石门毒株体外增殖能力比较 | 第39-42页 |
| 2.2 感染后96h细胞内外病毒滴度的比较 | 第42-43页 |
| 2.3 细胞间扩散能力的比较 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 第二章 猪瘟石门毒株感染克隆构建及病毒拯救 | 第47-63页 |
| 摘要 | 第47-48页 |
| 1. 材料与方法 | 第48-55页 |
| 1.1 材料 | 第48-49页 |
| 1.1.1 细胞系和病毒 | 第48页 |
| 1.1.2 质粒和试剂 | 第48-49页 |
| 1.2 方法 | 第49-55页 |
| 1.2.1 石门毒株全长基因组的分段克隆及测序 | 第49-51页 |
| 1.2.2 石门毒株全长感染性克隆质粒的构建 | 第51-53页 |
| 1.2.3 石门毒株全长感染性克隆体外转录及电转拯救 | 第53-54页 |
| 1.2.4 重组石门病毒的体外增殖能力的鉴定 | 第54-55页 |
| 1.2.4.1 重组石门病毒RecShimen子代病毒的检测 | 第54-55页 |
| 1.2.4.2 重组石门病毒RecShimen细胞增殖能力的测定 | 第55页 |
| 1.2.4.3 带毒连续传代体系的稳定性鉴定 | 第55页 |
| 2 结果 | 第55-60页 |
| 2.1 石门基因组分段扩增及全长感染性克隆的连接和鉴定 | 第55-58页 |
| 2.1.1 石门基因组分段cDNA扩增产物鉴定 | 第55页 |
| 2.1.2 SF123及SF456半长重组质粒的鉴定 | 第55-57页 |
| 2.1.3 全长感染性克隆的连接产物鉴定及稳定性检测 | 第57-58页 |
| 2.2 基因组的体外转录产物鉴定 | 第58页 |
| 2.3 重组石门子代病毒的检测及连续传代培养体系的鉴定 | 第58-60页 |
| 2.4 RecShimen与父本石门毒株体外增殖能力的比较 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-63页 |
| 第三章 基于石门和C株感染性克隆的嵌合猪瘟毒株构建及其特性分析 | 第63-89页 |
| 摘要 | 第63-65页 |
| 1 材料与方法 | 第65-70页 |
| 1.1 材料 | 第65页 |
| 1.1.1 细胞系、质粒和抗体 | 第65页 |
| 1.1.2 试剂和耗材 | 第65页 |
| 1.2 方法 | 第65-70页 |
| 1.2.1 不同嵌合病毒的构建及鉴定 | 第65-70页 |
| 1.2.2 嵌合病毒的体外拯救 | 第70页 |
| 1.2.3 嵌合病毒感染性克隆体外增殖能力的比较 | 第70页 |
| 1.2.4 嵌合病毒兔体定型热反应测定 | 第70页 |
| 2 结果 | 第70-85页 |
| 2.1 不同嵌合片段的构建结果 | 第70-72页 |
| 2.2 不同嵌合感染性克隆全长质粒以及相应体外转录RNA的鉴定 | 第72页 |
| 2.3 半长置换嵌合病毒(C.D.E.G)的拯救和子代病毒鉴定 | 第72-74页 |
| 2.4 半长置换嵌合病毒(C.D.E.G)增殖能力的鉴定 | 第74-76页 |
| 2.5 分段置换非结构蛋白的嵌合感染性克隆的拯救 | 第76-77页 |
| 2.6 分段置换非结构蛋白嵌合病毒细胞增殖特性的比较 | 第77-82页 |
| 2.6.1 分段置换石门株非结构蛋白的C株嵌合病毒体外增殖比较 | 第78页 |
| 2.6.2 分段置换C株非结构蛋白的石门嵌合病毒体外增殖比较 | 第78-82页 |
| 2.7 嵌合病毒兔体定型热反应 | 第82-85页 |
| 3. 讨论 | 第85-89页 |
| 第四章 猪瘟病毒NS2蛋白跨膜区功能初步探索 | 第89-108页 |
| 摘要 | 第89-91页 |
| 1 材料与方法 | 第91-97页 |
| 1.1 材料 | 第91页 |
| 1.1.1 细胞和质粒 | 第91页 |
| 1.1.2 酶和试剂 | 第91页 |
| 1.2 方法 | 第91-97页 |
| 1.2.1 NS2跨膜区结构和序列的预测 | 第91页 |
| 1.2.2 不同跨膜区片段扩增及EGFP融合表达载体的构建 | 第91-94页 |
| 1.2.3 ST细胞转染 | 第94页 |
| 1.2.4 ST细胞内质网和细胞核染色 | 第94页 |
| 1.2.6 定点突变PCR | 第94-97页 |
| 1.2.7 NS2跨膜区突变病毒的体外拯救 | 第97页 |
| 1.2.8 突变病毒的子代病毒检测和TCID_(50)的测定 | 第97页 |
| 1.2.9 突变病毒细胞传代过程中细胞内复制水平的测定 | 第97页 |
| 2 结果 | 第97-105页 |
| 2.1 NS2跨膜区内质网定位的预测及不同跨膜区段序列 | 第97-98页 |
| 2.2 NS2蛋白不同区段与EGFP融合表达的检测 | 第98-100页 |
| 2.3 不同跨膜区段在ST细胞内质网的定位 | 第100-102页 |
| 2.4 NS2跨膜区在猪瘟病毒复制中的功能的初步探索 | 第102-105页 |
| 2.4.1 NS2 N端跨膜结构突变的石门全长感染性克隆构建和鉴定 | 第102页 |
| 2.4.2 跨膜结构单一缺失突变石门病毒RecShimen失去复制能力 | 第102-104页 |
| 2.4.3 跨膜结构正中插入丙氨酸突变影响RecShimen的复制和组装 | 第104-105页 |
| 3. 讨论 | 第105-108页 |
| 结论 | 第108-109页 |
| 创新点 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-122页 |
| 作者简介 | 第122-123页 |
| 攻读博士期间发表的论文成果 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
