| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 植物病原细菌 | 第12页 |
| 1.2 主要植物病原细菌 | 第12-16页 |
| 1.2.1 木质部难养菌属(Xylella) | 第12-13页 |
| 1.2.2 土壤杆菌属(Agrobateriem) | 第13-14页 |
| 1.2.3 茄科罗尔斯通氏菌属(Ralstonia solanacearum) | 第14页 |
| 1.2.4. 欧文氏杆菌属(Erwinia) | 第14页 |
| 1.2.5 假单胞杆菌属(Pseudomonas) | 第14-15页 |
| 1.2.6 黄单胞菌属(Xanthomonas) | 第15-16页 |
| 1.3 十字花科黑腐病菌(X.campestris pv. campestris 8004) | 第16页 |
| 1.4 植物病原细菌的致病因子 | 第16-18页 |
| 1.5 细菌分泌系统 | 第18-21页 |
| 1.6 hrp基因簇 | 第21-22页 |
| 1.7 启动子区特征 | 第22-23页 |
| 1.8 PIP-box序列 | 第23-24页 |
| 1.9 研究内容和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-51页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第26-29页 |
| 2.2 培养基、培养条件及菌株保存方法 | 第29-30页 |
| 2.2.1 培养基 | 第29-30页 |
| 2.2.2 培养条件 | 第30页 |
| 2.2.3 菌株保存方法 | 第30页 |
| 2.3 常用抗生素及其他试剂 | 第30-32页 |
| 2.4 常用溶液及缓冲液 | 第32页 |
| 2.5 试剂与耗材 | 第32-33页 |
| 2.6 细菌总DNA的提取 | 第33页 |
| 2.7 快速裂解法少量提取质粒DNA | 第33-34页 |
| 2.8 PCR反应 | 第34-37页 |
| 2.8.1 引物设计 | 第34-36页 |
| 2.8.2 模板制备 | 第36-37页 |
| 2.8.3 反应体系 | 第37页 |
| 2.9 琼脂糖凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2.10 DNA酶切 | 第38页 |
| 2.11 DNA纯化 | 第38-39页 |
| 2.11.1 DNA片段纯化 | 第38页 |
| 2.11.2 DNA片段胶回收 | 第38-39页 |
| 2.12 DNA连接 | 第39页 |
| 2.13 转化 | 第39-40页 |
| 2.13.1 电脉冲转化感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 2.13.2 CaCl_2法感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| 2.13.3 电脉冲转化 | 第40页 |
| 2.13.4 CaCl_2法化学转化 | 第40页 |
| 2.14 三亲本接合 | 第40-41页 |
| 2.15 β-半乳糖苷酶(GUS)活性测定 | 第41-43页 |
| 2.15.1 定性检测 | 第41-42页 |
| 2.15.2 定量检测 | 第42-43页 |
| 2.16 细菌总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.16.1 总RNA的提取 | 第43页 |
| 2.16.2 RNA消化和验证 | 第43-44页 |
| 2.17.5 RACE | 第44-47页 |
| 2.17.1 5'R/ACE原理 | 第44-46页 |
| 2.17.2 5'RACE引物设计策略 | 第46-47页 |
| 2.17.3 5'RACE操作 | 第47页 |
| 2.18 T载体连接和DNA测序 | 第47页 |
| 2.19 Fusion PCR技术 | 第47-48页 |
| 2.20 细菌单杂交技术 | 第48-51页 |
| 第三章 5'RACE确定转录起始位点 | 第51-67页 |
| 3.1 前言 | 第51-54页 |
| 3.2 5'RACE操作 | 第54-57页 |
| 3.3 5'RACE结果 | 第57-64页 |
| 3.3.1 XC0052测序结果分析 | 第57-58页 |
| 3.3.2 XC0268测序结果分析 | 第58页 |
| 3.3.3 XC1553测序结果分析 | 第58-59页 |
| 3.3.4 XC2004测序结果分析 | 第59-60页 |
| 3.3.5 XC2602测序结果分析 | 第60-61页 |
| 3.3.6 XC2995测序结果分析 | 第61-62页 |
| 3.3.7 XC3177测序结果分析 | 第62-63页 |
| 3.3.8 XC2827测序结果分析 | 第63页 |
| 3.3.9 XC3176测序结果分析 | 第63-64页 |
| 3.4 小结及讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 基于Fusion PCR的点突变体构建 | 第67-75页 |
| 4.1 Fusion PCR点突变构建技术路线 | 第67页 |
| 4.2 Fusion PCR引物设计策略 | 第67-69页 |
| 4.4 GUS酶活检测 | 第69-73页 |
| 4.4.1 XC0052 GUS酶活检测 | 第69-70页 |
| 4.4.2 XC1553 GUS酶活检测 | 第70-71页 |
| 4.4.3 XC3160 GUS酶活检测 | 第71-72页 |
| 4.4.4 XC0268 GUS酶活检测 | 第72-73页 |
| 4.5 小结及讨论 | 第73-75页 |
| 第五章 细菌单杂交 | 第75-77页 |
| 5.1 细菌单杂交系统的构建 | 第75-76页 |
| 5.2 小结与讨论 | 第76-77页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第77-80页 |
| 6.1 PIP-box和-10 box在转录活性中的重要性 | 第77-78页 |
| 6.2 结果与展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第89页 |
