| 致谢 | 第4-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 烟草黑胫病概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 烟草黑胫病分布和危害 | 第12页 |
| 1.1.2 烟草黑胫病的症状 | 第12页 |
| 1.1.3 烟草黑胫病的传播途径和发病条件 | 第12-13页 |
| 1.1.4 烟草黑胫病菌的形态学特征 | 第13页 |
| 1.1.5 烟草黑胫病病害的防治 | 第13-14页 |
| 1.1.5.1 推广抗病品种 | 第13页 |
| 1.1.5.2 合理轮作 | 第13页 |
| 1.1.5.3 推广高垄栽培 | 第13页 |
| 1.1.5.4 药剂防治 | 第13页 |
| 1.1.5.5 生物防治 | 第13-14页 |
| 1.2 烟草根黑腐病概述 | 第14-15页 |
| 1.2.1 烟草根黑腐病的分布和危害 | 第14页 |
| 1.2.2 烟草根黑腐病的症状 | 第14页 |
| 1.2.3 烟草根黑腐病的传播途径和发病条件 | 第14页 |
| 1.2.4 烟草根黑腐病菌的形态学特征 | 第14-15页 |
| 1.2.5 烟草根黑腐病病害的防治 | 第15页 |
| 1.2.5.1 选栽抗病品种 | 第15页 |
| 1.2.5.2 实行轮作 | 第15页 |
| 1.2.5.3 加强栽培管理 | 第15页 |
| 1.2.5.4 药剂防治 | 第15页 |
| 1.2.5.5 生物防治 | 第15页 |
| 1.3 真菌遗传多样性的研究方法 | 第15-20页 |
| 1.3.1 分子标记技术 | 第15-17页 |
| 1.3.1.1 RFLP技术 | 第15-16页 |
| 1.3.1.2 SSR技术 | 第16页 |
| 1.3.1.3 RAPD技术 | 第16-17页 |
| 1.3.1.4 AFLP技术 | 第17页 |
| 1.3.2 用于遗传多样性分析的DNA序列 | 第17-20页 |
| 1.3.2.1 rDNA-ITS序列 | 第17-18页 |
| 1.3.2.2 β-tubulin序列 | 第18页 |
| 1.3.2.3 TEF-1α序列 | 第18-19页 |
| 1.3.2.4 线粒体DNA | 第19-20页 |
| 1.4 植物病原真菌分子检测的主要方法 | 第20-22页 |
| 1.4.1 聚合酶链式(PCR)技术 | 第20-21页 |
| 1.4.2 荧光定量PCR技术 | 第21页 |
| 1.4.3 Southen印迹技术 | 第21-22页 |
| 1.4.4 基因芯片技术 | 第22页 |
| 1.4.5 多重PCR在植物病原真菌检测中的应用 | 第22页 |
| 1.5 本研究的目的意义和技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 河南省烟草黑胫病菌群体遗传多样性分析 | 第24-39页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-29页 |
| 2.1.1 材料、仪器和试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.1.1 供试菌株 | 第24页 |
| 2.1.1.2 仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.2 方法 | 第25-29页 |
| 2.1.2.1 实验耗材处理 | 第25-26页 |
| 2.1.2.2 菌种的培养和收集 | 第26页 |
| 2.1.2.3 DNA的提取 | 第26页 |
| 2.1.2.4 引物设计与合成 | 第26-27页 |
| 2.1.2.5 rDNA+ITS,β-tubulin,Ras,Gpi,Cox1基因序列的克隆、测序 | 第27-29页 |
| 2.1.2.6 基因序列分析和进化树的构建 | 第29页 |
| 2.1.2.7 基因型多样性指数分析 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-38页 |
| 2.3.1 菌种培养结果 | 第29页 |
| 2.3.2 总DNA提取与检测 | 第29-30页 |
| 2.3.3 基因克隆和测序 | 第30-31页 |
| 2.3.4 rDNA-ITS,β-tubulin,Ras,Gpi,Cox1基因序列分析 | 第31-32页 |
| 2.3.5 烟草黑胫病菌株的亲缘关系分析 | 第32-37页 |
| 2.3.5.1 基于rDNA-ITS基因序列进化关系 | 第32-33页 |
| 2.3.5.2 基于β-tubulin基因序列进化关系 | 第33-34页 |
| 2.3.5.3 基于Ras基因序列进化关系 | 第34页 |
| 2.3.5.4 基于Gpi基因序列进化关系 | 第34页 |
| 2.3.5.5 基于Cox1基因序列进化关系 | 第34页 |
| 2.3.5.6 基于rDNA-ITS,β-tubulin,Ras,Gpi,Cox1基因联合进化关系 | 第34-37页 |
| 2.3.6 河南省烟草黑胫病菌进化与地理分布关系分析 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 河南省烟草根黑腐病菌遗传多样性分析 | 第39-49页 |
| 3.1 材料与方法 | 第39-40页 |
| 3.1.1 材料 | 第39页 |
| 3.1.1.1 菌株来源 | 第39页 |
| 3.1.2 方法 | 第39-40页 |
| 3.1.2.2 菌丝培养和收集 | 第39页 |
| 3.1.2.3 总DNA提取 | 第39页 |
| 3.1.2.4 引物设计和合成 | 第39-40页 |
| 3.1.2.5 rDNA+ITS、β-tubulin、TEF-1a片段序列的克隆、测序 | 第40页 |
| 3.2 结果与分析 | 第40-47页 |
| 3.2.1 总DNA提取 | 第40页 |
| 3.2.2 rDNA-ITS,β-tubulin,TEF-1a基因克隆和测序 | 第40-41页 |
| 3.2.3 rDNA-ITS基因序列分析 | 第41页 |
| 3.2.4 β-tubulin基因序列分析 | 第41页 |
| 3.2.5 TEF-1a基因序列分析 | 第41-42页 |
| 3.2.6 rDNA-ITS,β-tubulin,TEF-1a基因序列联合分析 | 第42-45页 |
| 3.2.7 基于rDNA-ITS,β-tubulin,TE-F-1a基因序列菌系进化关系 | 第45-47页 |
| 3.2.7.1 基于rDNA-ITS基因序列菌系进化关系 | 第45页 |
| 3.2.7.2 基于β-tubulin基因序列菌系进化关系 | 第45-46页 |
| 3.2.7.3 基于TEF-1a基因序列进化关系 | 第46-47页 |
| 3.2.7.4 基于rDNA-ITS,β-tubulin,TEF-1a基因序列联合进化关系 | 第47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 烟草黑胫病菌和根黑腐病菌分子检测体系的建立 | 第49-63页 |
| 4.1 材料与方法 | 第49-54页 |
| 4.1.1 材料 | 第49页 |
| 4.1.1.1 菌株来源 | 第49页 |
| 4.1.1.2 主要仪器和试剂 | 第49页 |
| 4.1.2 方法 | 第49-54页 |
| 4.1.2.1 菌丝的培养和收集 | 第49页 |
| 4.1.2.2 总DNA的提取 | 第49-50页 |
| 4.1.2.3 引物设计与合成 | 第50-51页 |
| 4.1.2.4 引物退火温度的确定 | 第51页 |
| 4.1.2.5 引物特异性检测 | 第51页 |
| 4.1.2.7 荧光定量PCR检测 | 第51-53页 |
| 4.1.2.8 双重PCR检测体系的建立 | 第53-54页 |
| 4.2 结果与分析 | 第54-61页 |
| 4.2.1 总DNA的提取 | 第54-55页 |
| 4.2.2 烟草黑胫病菌rDNA-ITS和Hgd引物特异性 | 第55页 |
| 4.2.3 烟草黑胫病菌引物灵敏性常规PCR检测 | 第55-56页 |
| 4.2.4 烟草根黑腐病菌rDNA-ITS和β-rubulin引物特异性鉴定 | 第56页 |
| 4.2.5 烟草根黑腐病菌引物灵敏性检测 | 第56页 |
| 4.2.6 荧光定量QRT-PCR反应条件的优化 | 第56-57页 |
| 4.2.7 荧光定量PCR引物灵敏性检测 | 第57-58页 |
| 4.2.8 标准曲线绘制 | 第58-59页 |
| 4.2.9 双重PCR检测 | 第59-61页 |
| 4.2.9.1 双重PCR条件的优化 | 第59页 |
| 4.2.9.2 双重PCR特异性的鉴定 | 第59-60页 |
| 4.2.9.3 双重PCR检测病残体和烟田土壤 | 第60-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-63页 |
| 4.3.1 烟草黑胫病菌的检测方法的建立 | 第61页 |
| 4.3.2 烟草根黑腐病菌的检测方法的建立 | 第61页 |
| 4.3.3 双重PCR检测烟草黑胫病菌和根黑腐病菌 | 第61-62页 |
| 4.3.4 烟草黑胫病菌和根黑腐病菌分子检测体系的应用展望 | 第62-63页 |
| 第五章 小结 | 第63-64页 |
| 5.1 河南省烟草黑胫病菌群体遗传多样性 | 第63页 |
| 5.2 河南省烟草根黑腐病菌遗传多样性 | 第63页 |
| 5.3 烟草黑胫病菌和根黑腐病菌分子检测体系 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| Abstract | 第70-72页 |
| 附录1 | 第73-75页 |
| 附录2 | 第75-79页 |
| 附录3 | 第79页 |
