摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
英文缩略词表 | 第12-13页 |
第一章 绪论 | 第13-29页 |
1.1 对氧磷酶概述 | 第13-19页 |
1.1.1 对氧磷酶1的性质及研究背景 | 第14-17页 |
1.1.2 对氧磷酶1与人类流行病的关系 | 第17-19页 |
1.2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第19-27页 |
1.2.1 常用的巴斯德毕赤酵母宿主菌类型 | 第20-21页 |
1.2.2 常用的巴斯德毕赤酵母表达元件与载体 | 第21-24页 |
1.2.3 巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第24-25页 |
1.2.4 影响巴斯德毕赤酵母高效表达外源蛋白的主要因素 | 第25-27页 |
1.3 研究意义及主要内容 | 第27-29页 |
1.3.1 研究意义 | 第27页 |
1.3.2 研究内容 | 第27-29页 |
第二章 人对氧磷酶1在巴斯德毕赤酵母中的表达与纯化 | 第29-52页 |
2.1 引言 | 第29-30页 |
2.2 材料与试剂 | 第30-36页 |
2.2.1 菌株与材料 | 第30页 |
2.2.2 引物 | 第30页 |
2.2.3 试剂与耗材 | 第30-32页 |
2.2.4 培养基 | 第32页 |
2.2.5 主要溶液的配制 | 第32-34页 |
2.2.6 实验仪器 | 第34-36页 |
2.3 实验内容与方法 | 第36-45页 |
2.3.1 pPICZA-PON1重组质粒的构建 | 第36-39页 |
2.3.2 pPICZA-PON1重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
2.3.3 重组毕赤酵母工程菌株X33/pPICZA-PON1的构建 | 第40-41页 |
2.3.4 重组毕赤酵母工程菌株X33/pPICZA-PON1的鉴定 | 第41-42页 |
2.3.5 重组蛋白人对氧磷酶1在巴斯德毕赤酵母中的表达、纯化与酶活力测定 | 第42-45页 |
2.4 实验结果与讨论 | 第45-51页 |
2.4.1 重组毕赤酵母工程菌株X33/pPICZA-PON1构建与筛选鉴定 | 第45-48页 |
2.4.2 重组蛋白PON1的表达、纯化与鉴定 | 第48-50页 |
2.4.3 讨论 | 第50-51页 |
2.5 本章小结 | 第51-52页 |
第三章 重组人对氧磷酶1在巴斯德毕赤酵母中表达的发酵条件优化 | 第52-67页 |
3.1 引言 | 第52-53页 |
3.2 材料与试剂 | 第53-54页 |
3.2.1 菌株与材料 | 第53页 |
3.2.2 试剂与耗材 | 第53-54页 |
3.2.3 培养基 | 第54页 |
3.2.4 主要溶液的配制 | 第54页 |
3.2.5 实验仪器 | 第54页 |
3.3 实验内容与方法 | 第54-56页 |
3.3.1 重组人对氧磷酶1在巴斯德毕赤酵母中的优化表达 | 第54-55页 |
3.3.2 初始诱导菌体浓度对rhPON1摇瓶发酵过程中的影响 | 第55-56页 |
3.4 实验结果与讨论 | 第56-66页 |
3.4.1 对rhPON1表达存在影响的单因素实验 | 第56-58页 |
3.4.2 基于响应面分析的rhPON1表达优化 | 第58-63页 |
3.4.3 初始诱导菌体浓度对rhPON1摇瓶发酵过程中的影响 | 第63-65页 |
3.4.4 讨论 | 第65-66页 |
3.5 本章小结 | 第66-67页 |
第四章 重组人对氧磷酶1的酶学性质分析 | 第67-79页 |
4.1 引言 | 第67-68页 |
4.2 材料与试剂 | 第68-70页 |
4.2.1 材料 | 第68页 |
4.2.2 试剂与耗材 | 第68页 |
4.2.3 主要溶液的配制 | 第68-70页 |
4.2.4 实验仪器 | 第70页 |
4.3 实验内容与方法 | 第70-72页 |
4.3.1 重组蛋白PON1的表达与酶活力测定 | 第70页 |
4.3.2 重组蛋白PON1的酶学性质分析 | 第70-72页 |
4.4 实验结果与讨论 | 第72-77页 |
4.4.1 rhPON1动力学参数测定 | 第72-73页 |
4.4.2 rhPON1的最适反应温度 | 第73-74页 |
4.4.3 rhPON1的热稳定性 | 第74-75页 |
4.4.4 rhPON1的最适反应pH | 第75页 |
4.4.5 金属离子及抑制剂对rhPON1酶活力的影响 | 第75-76页 |
4.4.6 讨论 | 第76-77页 |
4.5 本章小结 | 第77-79页 |
第五章 结论与展望 | 第79-80页 |
5.1 结论 | 第79页 |
5.2 展望 | 第79-80页 |
参考文献 | 第80-90页 |
攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第90-91页 |
致谢 | 第91-92页 |
附件 | 第92页 |