| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词表及其英汉对照 | 第14-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-46页 |
| 1 大豆花叶病毒概述 | 第19-28页 |
| 1.1 大豆花叶病毒病的发现 | 第19页 |
| 1.2 大豆花叶病毒的症状与危害 | 第19-21页 |
| 1.3 大豆花叶病毒的寄主范围与株系划分 | 第21-24页 |
| 1.4 大豆花叶病毒的性质与基因组结构功能 | 第24-27页 |
| 1.5 大豆花叶病毒病的防治 | 第27-28页 |
| 2 大豆遗传转化的研究进展 | 第28-42页 |
| 2.1 大豆转基因的方法 | 第28-33页 |
| 2.2 大豆遗传转化相关基因 | 第33-35页 |
| 2.3 农杆菌介导大豆转基因方法的优化 | 第35-36页 |
| 2.4 转基因方法在大豆改良中的应用 | 第36-42页 |
| 3 RNA干扰的研究进展 | 第42-45页 |
| 3.1 RNA干扰现象的发现 | 第42页 |
| 3.2 RNA干扰的作用机制 | 第42-44页 |
| 3.3 RNA干扰在抗病毒转基因大豆研究中的应用 | 第44-45页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第45-46页 |
| 第二章 大豆花叶病毒HC-Pro基因干扰片段克隆及其RNAi载体的构建 | 第46-62页 |
| 1 材料与方法 | 第46-53页 |
| 1.1 试验材料 | 第46-47页 |
| 1.2 实验方法 | 第47-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-60页 |
| 2.1 RNAi目标区段HC-Proi的克隆 | 第53-55页 |
| 2.2 BP入门克隆和LR表达克隆的构建 | 第55-57页 |
| 2.3 RNAi载体的鉴定 | 第57-59页 |
| 2.4 大豆遗传转化工程菌的获得 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 第三章 农杆菌介导大豆子叶节遗传转化体系的优化 | 第62-80页 |
| 1 材料与方法 | 第63-68页 |
| 1.1 试验材料 | 第63-64页 |
| 1.2 实验方法 | 第64-68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-78页 |
| 2.1 氯气灭菌对污染率及种子萌发率的影响 | 第68-69页 |
| 2.2 不同类型外植体的GUS瞬时表达率 | 第69-71页 |
| 2.3 农杆菌菌液浓度与侵染液浓度对GUS瞬时表达率的影响 | 第71-74页 |
| 2.4 最佳侵染时间的确定 | 第74-75页 |
| 2.5 最佳暗培养天数的确定 | 第75-76页 |
| 2.6 筛选高活力、易感和高再生大豆基因型 | 第76-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| 第四章 SMV HC-Pro基因的遗传转化 | 第80-92页 |
| 1 材料与方法 | 第80-85页 |
| 1.1 试验材料 | 第80-81页 |
| 1.2 实验方法 | 第81-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-90页 |
| 2.1 抗性组培幼苗的获得 | 第85-88页 |
| 2.2 阳性T_0代转基因大豆植株的筛选 | 第88-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 第五章 转基因大豆T_1和T_2代对SMV的抗病鉴定 | 第92-112页 |
| 1 材料与方法 | 第92-98页 |
| 1.1 试验材料 | 第92-93页 |
| 1.2 实验方法 | 第93-98页 |
| 2 结果与分析 | 第98-110页 |
| 2.1 阳性T_1植株的筛选 | 第98-99页 |
| 2.2 T_1植株Southern blot杂交结果 | 第99-100页 |
| 2.3 T_1代分离比卡方(χ~2)分析 | 第100-102页 |
| 2.4 T_1代转基因大豆植株SMV抗病鉴定 | 第102-104页 |
| 2.5 T_1代转基因大豆植株qRT-PCR和DAS-ELISA分析 | 第104-107页 |
| 2.6 T_2代转基因大豆植株SMV抗病鉴定 | 第107-108页 |
| 2.7 T_2代转基因大豆植株DAS-ELISA分析 | 第108-109页 |
| 2.8 T_3种子表型观察 | 第109-110页 |
| 3 讨论 | 第110-112页 |
| 第六章 应用转基因本氏烟验证SMV抗病候选基因功能的初步探索 | 第112-124页 |
| 1 材料与方法 | 第112-117页 |
| 1.1 试验材料 | 第112-114页 |
| 1.2 实验方法 | 第114-117页 |
| 2 结果与分析 | 第117-121页 |
| 2.1 SMV症状调查 | 第117-118页 |
| 2.2 SMV分子检测 | 第118-119页 |
| 2.3 回接南农1138-2及SMV CP基因测序分析 | 第119-121页 |
| 3 讨论 | 第121-124页 |
| 全文结论及创新点 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-148页 |
| 附录 | 第148-180页 |
| 附录1 汁液摩擦接种法繁殖、活化SMV | 第148页 |
| 附录2 总RNA提取试剂盒说明书(Tiangen) | 第148-149页 |
| 附录3 DNA凝胶回收试剂盒说明书(Axygen) | 第149页 |
| 附录4 热激法转化大肠杆菌感受态DH5α | 第149-150页 |
| 附录5 质粒DNA小量提取试剂盒说明书(Axygen) | 第150-151页 |
| 附录6 农杆菌菌株EHA105感受态制备 | 第151页 |
| 附录7 冻融法转化农杆菌感受态细胞EHA105 | 第151-152页 |
| 附录8 植物基因组DNA提取试剂盒说明书(Tiangen) | 第152页 |
| 附录9 Southern blot缓冲液配制和具体操作步骤 | 第152-156页 |
| 附录10 CTAB缓冲液配制和具体操作步骤 | 第156-157页 |
| 附录11 DAS-ELISA缓冲液配制和具体操作步骤 | 第157-159页 |
| 附录12 相关培养基及母液配方 | 第159-160页 |
| 附表1 | 第160-164页 |
| 附表2 | 第164-171页 |
| 附表3 | 第171-178页 |
| 附表4 | 第178-180页 |
| 撰写论文情况 | 第180-182页 |
| 致谢 | 第182页 |
