| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 研究背景 | 第13-21页 |
| 1.1 血吸虫及血吸虫病研究概况 | 第13-17页 |
| 1.1.1 血吸虫病的分类及地理分布 | 第13页 |
| 1.1.2 日本血吸虫的生活史及致病机理 | 第13-14页 |
| 1.1.3 日本血吸虫的流行现状 | 第14-15页 |
| 1.1.4 血吸虫病的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.1.5 日本血吸虫的发育和产卵机制 | 第16页 |
| 1.1.6 酪氨酸酶的分布及作用 | 第16-17页 |
| 1.2 研究方法 | 第17-19页 |
| 1.2.1 生物信息学方法 | 第17页 |
| 1.2.2 RT-PCR技术 | 第17-18页 |
| 1.2.3 RNA干扰技术 | 第18-19页 |
| 1.3 研究内容及研究意义 | 第19页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第19页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第19页 |
| 1.4 研究的技术路线 | 第19-21页 |
| 第2章 日本血吸虫两种酪氨酸酶(Tyrosinase1,Tyrosinase2)的生物信息学分析 | 第21-26页 |
| 2.1 实验方法 | 第21页 |
| 2.2 实验结果 | 第21-24页 |
| 2.2.1 SjTYR1和SjTYR2的基因序列分析 | 第21-22页 |
| 2.2.2 SjTYR1和SjTYR2的氨基酸序列分析 | 第22页 |
| 2.2.3 SjTYR1和SjTYR2蛋白质功能位点及结构域的预测 | 第22页 |
| 2.2.4 SjTYR1和SjTYR2的氨基酸同源序列比对分析及系统分子进化树的构建 | 第22-24页 |
| 2.3 小节与讨论 | 第24-26页 |
| 第3章 日本血吸虫两种酪氨酸酶(Tyrosinase1,Tyrosinase2)原核重组质粒构建及表达和纯化 | 第26-41页 |
| 3.1 实验材料及实验仪器,试剂 | 第26-28页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第26-27页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第27页 |
| 3.1.4 常用溶液及试剂的配方 | 第27-28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-35页 |
| 3.2.1 分子克隆 | 第28-31页 |
| 3.2.2 重组蛋白的小量表达 | 第31-32页 |
| 3.2.3 重组蛋白的大量表达及纯化 | 第32-33页 |
| 3.2.4 蛋白质免疫印迹(Westen Blot)分析 | 第33-34页 |
| 3.2.5 PAGE胶割胶回收蛋白 | 第34页 |
| 3.2.6 质谱测序分析鉴定蛋白 | 第34-35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-40页 |
| 3.3.1 SjTYR1和SjTYR2的PCR扩增结果 | 第35页 |
| 3.3.2 pSJ2/SjTYR1和pSJ2/SjTYR2重组质粒的构建和验证 | 第35-36页 |
| 3.3.3 重组蛋白的小量表达 | 第36-37页 |
| 3.3.4 重组蛋白SjTYR1,SjTYR2的Western blot及质谱鉴定 | 第37-39页 |
| 3.3.5 重组蛋白的大量表达与纯化 | 第39-40页 |
| 3.4 小节与讨论 | 第40-41页 |
| 第4章 日本血吸虫两种酪氨酸酶(Tryrosinase1,Tyrosinase2)兔多克隆抗体的制备与免疫原性分析 | 第41-48页 |
| 4.1 实验材料及实验仪器,试剂 | 第41-42页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第41页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第41-42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 rSjTYR1和rSjTYR2多克隆抗体的制备 | 第42页 |
| 4.2.2 兔多克隆抗体的纯化 | 第42页 |
| 4.2.3 间接ELISA法评价多克隆抗体滴度实验 | 第42-43页 |
| 4.2.4 蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析重组蛋白的免疫原性 | 第43页 |
| 4.3 实验结果 | 第43-47页 |
| 4.3.1 rSjTYR1和rSjTYR2多克隆抗体的制备 | 第43页 |
| 4.3.2 间接ELISA法评价多克隆抗体滴度实验 | 第43-44页 |
| 4.3.3 蛋白质免疫印迹分析 | 第44-47页 |
| 4.4 小节与讨论 | 第47-48页 |
| 第5章 日本血吸虫两种酪氨酸酶在日本血吸虫成熟阶段的转录特异性分析 | 第48-55页 |
| 5.1 实验材料与实验仪器,试剂 | 第48页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第48页 |
| 5.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 5.2.1 日本血吸虫的感染实验 | 第49页 |
| 5.2.3 不同时期日本血吸虫的获取 | 第49页 |
| 5.2.4 日本血吸虫总RNA的抽提 | 第49-50页 |
| 5.2.5 日本血吸虫总RNA的反转录 | 第50-51页 |
| 5.3 实验结果 | 第51-54页 |
| 5.3.1 日本血吸虫不同时期的虫体总RNA的浓度及质量测定 | 第51页 |
| 5.3.2 SjTYR1基因和SjTYR2基因的转录特异性分析 | 第51-54页 |
| 5.4 小节与讨论 | 第54-55页 |
| 第6章 日本血吸虫两种重组酪氨酸酶蛋白的免疫保护实验 | 第55-58页 |
| 6.1 实验材料与实验仪器,试剂 | 第55页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第55页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第55页 |
| 6.1.3 实验试剂 | 第55页 |
| 6.2 实验方法 | 第55-56页 |
| 6.2.1 分组设置及免疫方案 | 第55-56页 |
| 6.2.2 取血方案 | 第56页 |
| 6.2.3 日本血吸虫尾蚴攻击 | 第56页 |
| 6.2.4 免疫保护效果评价 | 第56页 |
| 6.3 实验结果 | 第56-57页 |
| 6.4 小节与讨论 | 第57-58页 |
| 第7章 利用RNA干扰技术分析酪氨酸酶(Tyrosinase1,Tyrosinase2)的功能 | 第58-66页 |
| 7.1 实验材料与实验仪器,试剂 | 第58-59页 |
| 7.1.1 实验材料 | 第58页 |
| 7.1.2 实验仪器 | 第58页 |
| 7.1.3 实验试剂 | 第58-59页 |
| 7.2 实验方法 | 第59-62页 |
| 7.2.1 化学合成siRNA干扰实验 | 第59页 |
| 7.2.2 双链RNA(dsRNA)法干扰实验 | 第59-62页 |
| 7.3 实验结果 | 第62-65页 |
| 7.3.1 化学合成siRNA干扰实验 | 第62-63页 |
| 7.3.2 dsRNA法干扰实验 | 第63-65页 |
| 7.4 小节与讨论 | 第65-66页 |
| 第8章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 8.1 结论 | 第66-67页 |
| 8.2 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
