| 中文摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 英文缩写词 | 第16-17页 |
| 第1章 绪论 | 第17-41页 |
| 1.1 透明颤菌血红蛋白(VHb)的发现和最初研究 | 第17-18页 |
| 1.2 VHb的基因调控机制 | 第18-20页 |
| 1.3 透明颤菌血红蛋白的表达 | 第20页 |
| 1.4 透明颤菌血红蛋白的结构与空间定位 | 第20-22页 |
| 1.5 透明颤菌血红蛋白生理功能的研究 | 第22-26页 |
| 1.6 透明颤菌血红蛋白及基因的应用 | 第26-31页 |
| 1.6.1 VHb在植物代谢工程中的应用 | 第26-27页 |
| 1.6.2 VHb在发酵工程中的应用 | 第27-30页 |
| 1.6.3 VHb降解毒害作用 | 第30-31页 |
| 1.7 本课题的立题意义和研究内容 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-41页 |
| 第2章 透明颤菌血红蛋白表达载体构建 | 第41-69页 |
| 2.1 前言 | 第41-42页 |
| 2.2 实验仪器材料和试剂 | 第42-46页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第42-43页 |
| 2.2.2 菌种与质粒 | 第43页 |
| 2.2.3 实验试剂及配置方法 | 第43-44页 |
| 2.2.4 酶和其它试剂及来源 | 第44-46页 |
| 2.3 实验设计 | 第46-57页 |
| 2.3.1 vgb基因的扩增 | 第48-53页 |
| 2.3.2 VHb的厌氧启动子的设计与研究 | 第53-54页 |
| 2.3.3 基因与厌氧启动子的链接 | 第54-56页 |
| 2.3.4 构建含vgb基因及厌氧启动子的pUC19质粒 | 第56-57页 |
| 2.3.5 重组质粒的鉴定 | 第57页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第57-65页 |
| 2.4.1 目的基因的PCR结果 | 第57-58页 |
| 2.4.2 重组质粒的提取 | 第58-59页 |
| 2.4.3 双酶切验证pUCm-T重组质粒 | 第59-60页 |
| 2.4.4 测序验证基因插入方向 | 第60-62页 |
| 2.4.5 pUC57+promoter+vgb的构建与验证 | 第62页 |
| 2.4.6 pUC19+promoter+vgb的构建与验证 | 第62-64页 |
| 2.4.7 测序验证 | 第64-65页 |
| 2.5 小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 第3章 透明颤菌血红蛋白的厌氧表达及纯化 | 第69-89页 |
| 3.1 前言 | 第69-70页 |
| 3.2 实验仪器材料和试剂 | 第70-73页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第70-71页 |
| 3.2.2 实验试剂及配置方法 | 第71-73页 |
| 3.3 实验设计 | 第73-77页 |
| 3.3.1 VHb的表达 | 第74页 |
| 3.3.2 蛋白纯化 | 第74-77页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第77-85页 |
| 3.4.1 蛋白表达的检测 | 第77-78页 |
| 3.4.2 硫酸铵沉淀 | 第78-79页 |
| 3.4.3 还原态样品制备 | 第79-80页 |
| 3.4.4 离子交换层析 | 第80-82页 |
| 3.4.5 凝胶过滤层析 | 第82-83页 |
| 3.4.6 SDS-PAGE | 第83-84页 |
| 3.4.7 VHb分离纯化的纯度和收率 | 第84-85页 |
| 3.5 小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-89页 |
| 第4章 脂结合和非脂结合的透明颤菌血红蛋白的特性及功能研究 | 第89-105页 |
| 4.1 前言 | 第89-90页 |
| 4.2 实验仪器材料和试剂 | 第90-91页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第90-91页 |
| 4.2.2 实验试剂及配置方法 | 第91页 |
| 4.3 实验设计 | 第91-93页 |
| 4.3.2 蛋白的纯化 | 第92页 |
| 4.3.3 紫外可见吸收光谱 | 第92页 |
| 4.3.4 园二色谱 | 第92页 |
| 4.3.5 拉曼光谱 | 第92页 |
| 4.3.6 过氧化氢酶活性测定 | 第92-93页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第93-100页 |
| 4.4.1 脂结合和非脂结合VHb的紫外可见吸收光谱 | 第93-95页 |
| 4.4.2 脂结合和非脂结合VHb的园二色谱的测定 | 第95-96页 |
| 4.4.3 透明颤菌血红蛋白的三级结构 | 第96-97页 |
| 4.4.5 脂结合和非脂结合的透明颤菌血红蛋白的拉曼光谱的测定 | 第97-99页 |
| 4.4.6 基本酶学特性参数 | 第99-100页 |
| 4.5 小结 | 第100页 |
| 参考文献 | 第100-105页 |
| 第5章 化学和物理因素影响透明颤菌血红蛋白酶活性的研究 | 第105-119页 |
| 5.1 前言 | 第105-106页 |
| 5.2 实验仪器材料和试剂 | 第106-108页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第106-107页 |
| 5.2.2 实验试剂及配置方法 | 第107页 |
| 5.2.3 其它试剂 | 第107-108页 |
| 5.3 实验设计 | 第108-109页 |
| 5.3.1 过氧化氢酶活性测定 | 第108页 |
| 5.3.2 pH相关过氧化物酶活性测定 | 第108-109页 |
| 5.3.3 温度相关过氧化物酶活性测定 | 第109页 |
| 5.3.4 动力学测定 | 第109页 |
| 5.3.5 差示量热测定 | 第109页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第109-116页 |
| 5.4.1 VHb的pH相关过氧化氢酶活性 | 第109-111页 |
| 5.4.2 VHb的温度相关过氧化氢酶活性 | 第111-112页 |
| 5.4.3 VHb与Mb的动力学研究 | 第112-113页 |
| 5.4.4 VHb与Mb米氏常数的测定 | 第113-115页 |
| 5.4.5 VHb的热转变温度测定 | 第115-116页 |
| 5.5 小结 | 第116页 |
| 参考文献 | 第116-119页 |
| 第6章 总结 | 第119-121页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
