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棉纤维伸长发育早期优势表达ESTs分析和棉纤维膜联蛋白基因的克隆及转基因功能初步鉴定

摘要第9-12页
ABSTRACT第12-15页
本文所用主要缩略词第16-17页
第一部分 文献综述第17-45页
    第一章 棉纤维发育相关研究进展第17-29页
        1 棉花纤维发育不同时期研究进展第18-21页
            1.1 起始分化期第18-19页
            1.2 伸长期/初生壁合成期第19-20页
            1.3 次生壁合成期第20-21页
            1.4 成熟期第21页
        2 棉纤维发育不同时期相关基因研究进展第21-29页
    第二章 基因芯片技术研究进展第29-35页
        1 基因芯片技术的概念第29页
        2 基因芯片的技术特点第29-30页
        3 基因芯片的分类第30页
        4 基因芯片技术在作物研究中的应用第30-33页
            4.1 研究植株对逆境的反应第30-31页
            4.2 基因组DNA序列分析第31页
            4.3 基因转录水平检测第31页
            4.4 植物基因突变和多态性状的检测第31-32页
            4.5 转基因作物相关检测第32页
            4.6 其他方面第32-33页
        5 基因芯片技术在棉纤维发育相关基因研究中的应用第33-35页
    第三章 膜联蛋白基因研究进展第35-43页
        1 植物annexins基因功能第35-39页
            1.1 细胞分泌第35-36页
            1.2 胼胝质酶活性和GTPase/ATPase活性第36-37页
            1.3 蛋白质磷酸化底物第37页
            1.4 植物膜联蛋白的过氧化物酶活性第37-38页
            1.5 植物膜联蛋白与非生物逆境联系第38-39页
        2 Annexins在植物细胞中的定位第39-40页
        3 植物annexins基因的功能总结和展望第40-43页
    本研究的目的和意义第43-45页
第二部分 研究报告第45-161页
    第四章 棉纤维伸长发育早期优势表达ESTs分析第45-81页
        1 材料与方法第45-54页
            1.1 试验材料第45-46页
            1.2 cDNA文库的构建第46页
            1.3 cDNA芯片的制备与杂交第46-47页
            1.4 ESTs的序列分析和功能分类第47-48页
            1.5 RT-PCR验证第48-54页
            1.6 利用[(TM-1×Hai7124)×TM-1]群体的基因定位第54页
        2 结果与分析第54-79页
            2.1 ESTs序列信息第54页
            2.2 杂交表达谱与差异表达基因的功能预测第54-72页
            2.3 基因芯片结果的RT-PCR验证第72-75页
            2.4 差异表达ESTs的染色体定位第75-79页
        3 讨论第79-81页
            3.1 基因芯片结果与RT-PCR结果的一致性第79页
            3.2 差异表达ESTs的功能分类第79页
            3.3 基因芯片材料与研究的目标材料之间的差异第79-80页
            3.4 差异表达ESTs的染色体定位第80-81页
    第五章 棉纤维膜联蛋白基因的克隆、鉴定和转基因功能初步分析第81-161页
        1 材料与方法第81-109页
            1.1 植物材料第81-82页
            1.2 菌种和质粒第82页
            1.3 试剂第82页
            1.4 基因全长克隆引物和RT-PCR引物第82-83页
            1.5 棉花RNA的提取第83-84页
            1.6 TAIL-PCR步骤第84-87页
            1.7 扩增产物的电泳,回收,克隆及测序第87-88页
            1.8 生物信息学分析第88-89页
            1.9 多重序列比对和遗传进化分析第89页
            1.10 特异基因基因组序列的分离和比对第89页
            1.11 RT-PCR分析第89-90页
            1.12 Southern杂交分析第90-92页
            1.13 Northern杂交分析第92-94页
            1.14 利用[(TM-1×Hai7124)×TM-1]群体的基因定位第94页
            1.15 载体构建及PCR检测引物第94-95页
            1.16 植物表达载体的构建第95-99页
            1.17 感受态细胞的制备和大肠杆菌的转化第99-100页
            1.18 阳性单克隆的检测第100-101页
            1.19 基因枪介导的瞬时表达载体在植物细胞的转化第101-102页
            1.20 培养基第102-105页
            1.21 农杆菌感受态的制备、转化、质粒的提取以及PCR检测第105-106页
            1.22 农杆菌介导的棉花遗传转化第106-108页
            1.23 再生植株的PCR检测第108页
            1.24 GUS染色分析第108-109页
        2 结果与分析第109-153页
            2.1 总RNA的完整性第109-110页
            2.2 ESTs序列的获得第110页
            2.3 GhFAnnl基因全长的克隆和表达分析第110-121页
            2.4 GhFAnnx基因全长的克隆和表达分析第121-134页
            2.5 GhFAnnl与GhFAnnx基因瞬时表达载体的构建第134-136页
            2.6 GhFAnnl与GhFAnnx基因pBI121表达载体的构建第136-142页
            2.7 GhFAnnl与GhFAnnx基因瞬时表达载体转化植物细胞第142-146页
            2.8 GhFAnnl与GhFAnnx基因的棉花遗传转化第146-148页
            2.9 GhFAnnl与GhFAnnx基因棉花转基因植株检测第148-153页
        3 讨论第153-161页
            3.1 棉花各组织器官RNA的提取第153-154页
            3.2 全长基因的概念第154页
            3.3 特异基因染色体定位的意义第154-155页
            3.4 相同基因在不同基因组的序列分析第155-156页
            3.5 融合表达载体的构建第156页
            3.6 Annexins基因在棉纤维中的可能功能第156-157页
            3.7 Annexins基因在洋葱表皮细胞中的亚细胞定位分析第157-158页
            3.8 Annexins基因对于棉纤维极性伸长起重要作用第158-159页
            3.9 Annexins基因在转基因棉花各组织器官的GUS染色分析第159-161页
全文结论第161-163页
参考文献第163-177页
发表论文第177-179页
致谢第179页

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