| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 目录 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-30页 |
| 1.1 植物蛋白降解的功能和途径 | 第15-21页 |
| 1.1.1 蛋白降解在植物生长发育中以及抗逆胁迫中的作用 | 第15-17页 |
| 1.1.2 蛋白降解的两条途径 | 第17-20页 |
| 1.1.3 自噬和泛素蛋白酶体途径在植物生长发育和逆境响应中的作用 | 第20-21页 |
| 1.2 E3泛素链接酶特异性的参与到蛋白酶体途径和自噬中 | 第21-23页 |
| 1.2.1 泛素化蛋白酶体途径和自噬之间的联系 | 第21-22页 |
| 1.2.2 E3泛素链接酶特异性的参与到蛋白酶体途径和自噬中 | 第22-23页 |
| 1.3 植物中PUB家族的结构和功能 | 第23-26页 |
| 1.3.1 植物中的U-box E3泛素连接酶 | 第23-24页 |
| 1.3.2 PUB蛋白功能及其在抗逆响应中的作用 | 第24-26页 |
| 1.4 dUTP与硫合成 | 第26-28页 |
| 1.4.1 dUTP的功能 | 第26-27页 |
| 1.4.2 LSU类蛋白和缺硫胁迫 | 第27-28页 |
| 1.5 全文目的和意义 | 第28-30页 |
| 2 拟南芥U-BOX E3泛素连接酶PUB19的生物学功能 | 第30-44页 |
| 摘要 | 第30-31页 |
| 2.1 材料与方法 | 第31-34页 |
| 2.1.1 拟南芥的基因型、生长条件以及MS培养基播种拟南芥的方法 | 第31-32页 |
| 2.1.2 非生物胁迫下AtPUB19基因被诱导的处理条件 | 第32页 |
| 2.1.3 非生物胁迫下pub19-1和pub19-3突变体响应分析 | 第32页 |
| 2.1.4 CTAB法提取植物总DNA | 第32-33页 |
| 2.1.5 总RNA提取和cDNA合成 | 第33-34页 |
| 2.1.6 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析 | 第34页 |
| 2.2 结果 | 第34-43页 |
| 2.2.1 拟南芥pub19突变体鉴定 | 第34-36页 |
| 2.2.2 AtPUB19生物信息学分析 | 第36-38页 |
| 2.2.3 拟南芥在高温、低温、干旱、盐害下AtPUB19基因被诱导表达 | 第38-41页 |
| 2.2.4 拟南芥pub19基因沉默后降低了对高温的抗性 | 第41-42页 |
| 2.2.5 拟南芥pub19基因沉默后提高了对干旱的抗性 | 第42-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-44页 |
| 3 运用酵母双杂交技术手段筛选与ATPUB19互作蛋白 | 第44-67页 |
| 摘要 | 第44-45页 |
| 3.1 材料与方法 | 第45-60页 |
| 3.1.1 菌株和文库 | 第45页 |
| 3.1.2 酵母表达载体构建 | 第45-47页 |
| 3.1.3 文库的滴定 | 第47-50页 |
| 3.1.4 酵母感受态制备及转化 | 第50-51页 |
| 3.1.5 酵母筛库方法 | 第51-53页 |
| 3.1.6 X-gal显色法 | 第53页 |
| 3.1.7 ONPG测定法 | 第53-54页 |
| 3.1.8 酵母质粒提取以及转入大肠杆菌并提取质粒 | 第54-55页 |
| 3.1.9 酶切鉴定 | 第55页 |
| 3.1.10 酵母相关培养基配置方法 | 第55-57页 |
| 3.1.11 IPTG蛋白诱导以及蛋白纯化 | 第57-60页 |
| 3.2 结果 | 第60-66页 |
| 3.2.1 诱饵载体以及PBD-GAL4-PUB19成功构建 | 第60-61页 |
| 3.2.2 诱饵蛋白在YRG-2酵母菌中不存在自激活和毒性现象 | 第61-62页 |
| 3.2.3 拟南芥cDNA文库的滴定测定及扩增 | 第62页 |
| 3.2.4 文库的初步筛选以及酶切鉴定 | 第62-63页 |
| 3.2.5 阳性克隆回转一一对应验证 | 第63-64页 |
| 3.2.6 PET32a-DUT1原核表达和蛋白纯化 | 第64-66页 |
| 3.3 讨论 | 第66-67页 |
| 4 与ATPUB19互作蛋白LSU3和DUT1初步的结构和功能分析 | 第67-90页 |
| 摘要 | 第67-68页 |
| 4.1 材料与方法 | 第68-76页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第68页 |
| 4.1.2 DUT1-Myc表达载体、DUT1-GFP、LSU-PAD、PUB18-PBD载体构建 | 第68-70页 |
| 4.1.3 DUT1转基因株系的产生 | 第70-71页 |
| 4.1.4 DUT1转基因株系的检测 | 第71-74页 |
| 4.1.5 AtDUT1亚细胞定位 | 第74-75页 |
| 4.1.6 霍兰格式培养基配方(改造过的配方) | 第75-76页 |
| 4.1.7 胁迫处理方法 | 第76页 |
| 4.2 结果 | 第76-88页 |
| 4.2.1 拟南芥LSU家族结构分析 | 第76-77页 |
| 4.2.2 LSU蛋白与AtPUB19蛋白特异性的互作,与AtPUB18蛋白不互作 | 第77-78页 |
| 4.2.3 拟南芥LSU1-4以及PUB19在缺硫胁迫下被诱导表达 | 第78-79页 |
| 4.2.4 LSUl-4在WT与pub19突变体植株在缺硫胁迫下的表达分析 | 第79-80页 |
| 4.2.5 缺硫胁迫下WT与pub19突变体植株的幼苗的生长情况 | 第80-83页 |
| 4.2.6 DUT1细胞核和细胞膜中均有分布 | 第83-84页 |
| 4.2.7 DUT1在一系列非生物胁迫中下调表达以及同源序列结构分析 | 第84-85页 |
| 4.2.8 DUT1转基因株系的鉴定 | 第85-87页 |
| 4.2.9 DUT1基因过表达后降低了对黑暗和氧化胁迫的抗性 | 第87-88页 |
| 4.3 讨论 | 第88-90页 |
| 5 总结与展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-104页 |
| 个人简历 | 第104页 |
