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赤潮藻亚历山大藻LC3培养及谷氨酸铜对其灭除机制研究

摘要第9-14页
ABSTRACT第14页
1 前言第20-44页
    1.1 赤潮及其危害性第20-23页
    1.2 赤潮发生原因及研究进展第23-26页
        1.2.1 生物因素第23-24页
        1.2.2 化学因素第24-26页
        1.2.3 物理因素第26页
    1.3 赤潮防治技术及研究进展第26-33页
        1.3.1 物理方法第27-28页
        1.3.2 化学方法第28-29页
        1.3.3 生物方法第29页
        1.3.4 赤潮防治技术的研究进展第29-33页
    1.4 亚历山大藻赤潮的危害性第33-36页
        1.4.1 产毒亚历山大藻的毒害机理第34-36页
        1.4.2 亚历山大藻的防治第36页
    1.5 差异蛋白质组学研究及其在海洋生物中的应用第36-44页
        1.5.1 蛋白质组学研究的背景及意义第36-37页
        1.5.2 差异蛋白质组学研究第37-39页
        1.5.3 常用的差异蛋白质组学研究方法第39-42页
        1.5.4 差异蛋白质组学在海洋生物中的应用第42-44页
2 氮、磷、铁、锰对亚历山大藻LC3生长的影响第44-52页
    2.1 材料和方法第44-47页
        2.1.1 实验材料第44-45页
        2.1.2 培养基第45-46页
        2.1.3 培养条件第46页
        2.1.4 正交表设计第46页
        2.1.5 生长测定第46-47页
    2.2 结果与讨论第47-51页
        2.2.1 氮、磷、铁、锰对亚历山大藻LC3生长速率的影响第47-49页
        2.2.2 讨论第49-51页
    2.3 结语第51-52页
3 不同杀灭剂对亚历山大藻LC3灭除的初步研究第52-61页
    3.1 材料和方法第53-54页
        3.1.1 实验材料第53页
        3.1.2 藻细胞计数方法第53页
        3.1.3 不同浓度辣椒素灭杀亚历山大藻LC3的测定第53页
        3.1.4 不同浓度过碳酸钠灭杀亚历山大藻LC3的测定第53-54页
        3.1.5 硫酸铜、谷氨酸铜对亚历山大藻LC3灭杀对比第54页
        3.1.6 谷氨酸铜浓度对亚历山大藻LC3存活率的影响第54页
        3.1.7 复合作用下HDTMAB浓度对亚历山大藻LC3存活率的影响第54页
    3.2 结果第54-58页
        3.2.1 不同浓度辣椒素对亚历山大藻LC3的杀灭结果第55页
        3.2.2 不同浓度过碳酸钠对亚历山大藻LC3的杀灭结果第55-56页
        3.2.3 硫酸铜、谷氨酸铜杀灭亚历山大藻LC3对比试验结果第56页
        3.2.4 不同浓度谷氨酸铜对亚历山大藻LC3的杀灭结果第56-57页
        3.2.5 复合作用下HDTMAB浓度对谷氨酸铜杀灭亚历山大藻LC3的影响第57-58页
    3.3 讨论第58-60页
        3.3.1 辣椒素及过碳酸钠对亚历山大藻LC3的灭除第58-59页
        3.3.2 谷氨酸铜对亚历山大藻LC3的灭除第59-60页
        3.3.3 HDTMAB对谷氨酸铜杀灭亚历山大藻LC3的促进第60页
    3.4 结语第60-61页
4 硫酸铜、谷氨酸铜以及表面活性剂对亚历山大藻LC3形态和超微结构的影响第61-73页
    4.1 材料和方法第62-63页
        4.1.1 实验材料第62页
        4.1.2 不同处理下亚历山大藻LC3的培养第62-63页
        4.1.3 亚历山大藻LC3细胞形态的扫描电镜观察第63页
        4.1.4 亚历山大藻LC3细胞超微结构的透射电镜观察第63页
    4.2 结果第63-69页
        4.2.1 无胁迫时亚历山大藻LC3的细胞形态及超微结构第63-64页
        4.2.2 谷氨酸铜胁迫对亚历山大藻LC3细胞形态及超微结构的影响第64-66页
        4.2.3 谷氨酸铜和HDTMAB协同胁迫对亚历山大藻LC3细胞形态及超微结构的影响第66-67页
        4.2.4 HDTMAB胁迫对藻细胞形态及超微结构的影响第67-68页
        4.2.5 硫酸铜胁迫对藻细胞形态及超微结构的影响第68-69页
    4.3 讨论第69-72页
        4.3.1 胁迫对亚历山大藻LC3质膜的损伤第69-70页
        4.3.2 胁迫对亚历山大藻LC3叶绿体及线粒体的损伤第70-71页
        4.3.3 亚历山大藻LC3对胁迫毒性的响应第71-72页
    4.4 结语第72-73页
5 谷氨酸铜和表面活性剂协同灭除亚历山大藻LC3机制的初步研究第73-82页
    5.1 材料和方法第74-75页
        5.1.1 实验材料第74页
        5.1.2 谷氨酸铜对亚历山大藻LC3细胞丙二醛、巯基含量及质膜透性影响的测定第74页
        5.1.3 复合作用下HDTMAB浓度对亚历山大藻LC3细胞丙二醛、巯基含量及质膜透性影响的测定第74-75页
        5.1.4 TBA法测定丙二醛(MDA)含量第75页
        5.1.5 DTNB显色法测定巯基含量第75页
        5.1.6 电导法测定细胞质膜透性第75页
    5.2 结果第75-78页
        5.2.1 谷氨酸铜胁迫对亚历山大藻LC3细胞中丙二醛、巯基含量及细胞膜透性的影响第75-76页
        5.2.2 复合作用下不同浓度HDTMAB对丙二醛、巯基含量及细胞膜透性的影响第76-78页
    5.3 讨论第78-80页
        5.3.1 谷氨酸铜对亚历山大藻LC3细胞生理活性的影响第78-80页
        5.3.2 复合作用下HDTMAB浓度对亚历山大藻LC3细胞生理活性的影响第80页
    5.4 结语第80-82页
6 外源Ca~(2+)对HDTMAB杀灭亚历山大藻LC3效果的影响及其机制初步研究第82-89页
    6.1 材料和方法第82-83页
        6.1.1 实验材料第82-83页
        6.1.2 复合作用下Ca~(2+)浓度对亚历山大藻LC3存活率影响的测定第83页
        6.1.3 复合作用下Ca~(2+)浓度对亚历山大藻LC3细胞丙二醛、巯基含量及质膜透性影响的测定第83页
    6.2 结果第83-86页
        6.2.1 不同浓度Ca~(2+)对HDTMAB杀灭亚历山大藻LC3的影响第83-84页
        6.2.2 复合作用下浓度Ca~(2+)对亚历山大藻LC3细胞丙二醛含量的影响第84页
        6.2.3 复合作用下浓度Ca~(2+)对亚历山大藻LC3细胞巯基含量的影响第84-86页
        6.2.4 复合作用下浓度Ca~(2+)对亚历山大藻LC3细胞质膜透性的影响第86页
    6.3 讨论第86-87页
    6.4 结语第87-89页
7 亚历山大藻LC3蛋白质组双向电泳图谱的构建第89-97页
    7.1 材料和方法第89-92页
        7.1.1 实验材料第90页
        7.1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白样品制备第90页
        7.1.3 双向凝胶电泳蛋白样品的提取和定量第90-91页
        7.1.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离第91页
        7.1.5 双向凝胶电泳分离第91-92页
        7.1.6 染色第92页
        7.1.7 图像分析及数据处理第92页
    7.2 结果第92-93页
        7.2.1 亚历山大藻LC3细胞可溶性蛋白质SDS-PAGE结果第92页
        7.2.2 亚历山大藻LC3细胞可溶性蛋白质双向电泳结果第92-93页
    7.3 讨论第93-96页
        7.3.1 亚历山大藻LC3细胞破碎第93-95页
        7.3.2 亚历山大藻LC3双向电泳样品溶解缓冲液第95页
        7.3.3 亚历山大藻LC3双向电泳样品浓缩及脱盐第95-96页
    7.4 结语第96-97页
8 利用SDS-PAGE和双向电泳技术进行谷氨酸铜灭除亚历山大藻LC3的机制研究第97-106页
    8.1 材料和方法第97-98页
        8.1.1 实验材料第97-98页
        8.1.2 藻种处理及蛋白提取、电泳分离第98页
    8.2 结果第98-101页
        8.2.1 复合作用下HDTMAB浓度对亚历山大藻LC3蛋白表达影响的SDS-PAGE结果第98-99页
        8.2.2 谷氨酸铜对亚历山大藻LC3细胞蛋白表达影响的双向电泳结果第99-101页
    8.3 讨论第101-105页
        8.3.1 复合作用下HDTMAB对亚历山大藻LC3蛋白表达的影响第101-103页
        8.3.2 谷氨酸铜对亚历山大藻LC3蛋白表达的影响第103-105页
    8.4 结语第105-106页
9 亚历山大藻LC3蛋白质双向电泳差异蛋白肽质量指纹图谱分析与鉴定第106-116页
    9.1 材料和方法第107-108页
        9.1.1 实验材料第107页
        9.1.2 质谱样品的制备第107-108页
        9.1.3 质谱样品分析第108页
        9.1.4 数据库查询第108页
    9.2 结果第108-110页
    9.3 讨论第110-114页
        9.3.1 谷氨酸铜胁迫下1,5-二磷酸核酮糖羧化酶表达的抑制第110-113页
        9.3.2 谷氨酸铜胁迫下RNA聚合酶表达的抑制第113-114页
        9.3.3 谷氨酸铜胁迫下新蛋白的表达第114页
    9.4 结语第114-116页
10 结论第116-121页
    10.1 氮、磷、铁、锰对亚历山大藻LC3生长均有促进作用第116页
    10.2 谷氨酸铜和HDTMAB可有效杀灭亚历山大藻LC3第116-117页
    10.3 亚历山大藻LC3形态和超微结构在硫酸铜、谷氨酸铜以及表面活性剂等胁迫下发生变化第117页
    10.4 谷氨酸铜和表面活性剂作用下亚历山大藻LC3膜透性、丙二醛及巯基含量发生变化第117-118页
    10.5 外源Ca~(2+)对HDTMAB杀灭亚历山大藻LC3的抑制及其机制第118页
    10.6 通过利用pH 3.0~10.0及pH 3.0~5.6的IPG预制胶条构建亚历山大藻LC3蛋白质组双向电泳图谱第118-119页
    10.7 利用SDS-PAGE和双向电泳技术研究谷氨酸铜灭除亚历山大藻LC3的机制第119页
    10.8 谷氨酸铜胁迫下亚历山大藻LC3蛋白质双向电泳差异蛋白肽质量指纹图谱分析与鉴定第119-121页
参考文献第121-142页
致谢第142-143页
附录第143页

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