| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-23页 |
| 1.1 兔出血症概述 | 第15-21页 |
| 1.1.1 病毒学分类与形态结构 | 第15-16页 |
| 1.1.2 RHDV的基因组研究 | 第16-17页 |
| 1.1.3 RHDV主要结构蛋白VP60的研究 | 第17页 |
| 1.1.4 流行病学 | 第17-18页 |
| 1.1.5 临床症状和病理变化 | 第18页 |
| 1.1.6 RHDV的变异与进化 | 第18-20页 |
| 1.1.7 RHDV诊断及防控 | 第20-21页 |
| 1.2 RHDV VP60表位研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 RHDV不同亚型VP60蛋白的原核表达和抗原性检测 | 第23-33页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 载体、感受态细胞 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.1.4 主要溶液和培养基的配置 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 序列比对 | 第24页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第24页 |
| 2.2.3 RHDV VP60基因的扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.4 VP60蛋白原核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.5 VP60蛋白的原核表达以及SDS-PAGE分析 | 第27页 |
| 2.2.6 原核表达VP60蛋白的切胶纯化 | 第27页 |
| 2.2.7 原核表达VP60蛋白的抗原性鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3 结果 | 第28-32页 |
| 2.3.1 序列比对 | 第28-29页 |
| 2.3.2 RHDV VP60基因的扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.3 原核重组质粒的双酶切鉴定 | 第30页 |
| 2.3.4 原核表达VP60蛋白的SDS-PAGE及Western blot分析 | 第30-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 不同亚型RHDV VP60蛋白的真核表达和抗原性检测 | 第33-38页 |
| 3.1 材料 | 第33页 |
| 3.1.1 载体、感受态细胞 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 3.1.4 主要溶液和培养基的配制 | 第33页 |
| 3.2 方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第33-34页 |
| 3.2.2 RHDV VP60基因的扩增 | 第34页 |
| 3.2.3 VP60蛋白真核表达载体的构建 | 第34页 |
| 3.2.4 转染 | 第34-35页 |
| 3.2.5 VP60蛋白的真核表达及抗原性分析 | 第35页 |
| 3.3 结果 | 第35-36页 |
| 3.3.1 RHDV VP60基因的扩增 | 第35页 |
| 3.3.2 真核重组质粒的PCR及双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.3 真核表达VP60蛋白的IFA检测 | 第36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 不同亚型RHDV VP60蛋白在昆虫杆状病毒中的表达和抗原性检测 | 第38-45页 |
| 4.1 材料 | 第38页 |
| 4.1.1 载体、病毒、感受态细胞 | 第38页 |
| 4.1.2 主要试剂和主要仪器 | 第38页 |
| 4.1.3 主要溶液和培养基的配制 | 第38页 |
| 4.2 方法 | 第38-41页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第38-39页 |
| 4.2.2 RHDV2 VP60基因的扩增 | 第39页 |
| 4.2.3 重组转移载体的构建 | 第39-40页 |
| 4.2.4 重组杆粒的构建及鉴定 | 第40页 |
| 4.2.5 重组杆状病毒的获得和扩增 | 第40-41页 |
| 4.2.6 重组杆状病毒VP60蛋白的表达及抗原性鉴定 | 第41页 |
| 4.3 结果 | 第41-43页 |
| 4.3.1 RHDV2 VP60基因的扩增 | 第41页 |
| 4.3.2 真核重组质粒的PCR及双酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 4.3.3 重组杆粒的PCR鉴定 | 第42页 |
| 4.3.4 重组杆状病毒的获得 | 第42-43页 |
| 4.3.5 昆虫杆状病毒系统表达VP60蛋白的IFA检测 | 第43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 不同亚型RHDV VP60蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第45-58页 |
| 5.1 材料 | 第45-46页 |
| 5.1.1 细胞和病毒 | 第45页 |
| 5.1.2 实验动物 | 第45页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第45页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第45-46页 |
| 5.1.5 主要溶液和培养基的配制 | 第46页 |
| 5.2 方法 | 第46-51页 |
| 5.2.1 动物免疫 | 第46页 |
| 5.2.2 小鼠免疫血清效价的测定 | 第46-47页 |
| 5.2.3 细胞融合 | 第47-48页 |
| 5.2.4 不用亚型RHDV阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第48-49页 |
| 5.2.5 杂交瘤细胞的亚克隆，冻存和复苏 | 第49-50页 |
| 5.2.6 杂交瘤细胞腹水的制备 | 第50页 |
| 5.2.7 不同亚型RHDV MAb的鉴定 | 第50-51页 |
| 5.3 结果 | 第51-56页 |
| 5.3.1 杂交瘤细胞株识别RHDV亚型的鉴定 | 第51-53页 |
| 5.3.2 不同亚型RHDV MAb的Western blot鉴定 | 第53-54页 |
| 5.3.3 不同亚型RHDV MAb的亚类鉴定 | 第54页 |
| 5.3.4 不同亚型RHDV MAb的IFA鉴定 | 第54-56页 |
| 5.3.5 不同亚型RHDV MAb腹水效价的测定 | 第56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 不同亚型RHDV VP60蛋白抗原表位的鉴定 | 第58-71页 |
| 6.1 材料 | 第58页 |
| 6.2 方法 | 第58-64页 |
| 6.2.1 RHDV1亚型MAb的表位鉴定 | 第58-61页 |
| 6.2.2 RHDV2亚型MAb的抗原表位鉴定 | 第61-64页 |
| 6.2.3 不同亚型RHDV MAb抗原表位保守性分析 | 第64页 |
| 6.3 结果 | 第64-69页 |
| 6.3.1 RHDV1亚型MAb的表位鉴定 | 第64-66页 |
| 6.3.2 RHDV2亚型MAb的表位鉴定 | 第66-67页 |
| 6.3.3 不同亚型RHDV MAb抗原表位保守性分析 | 第67-69页 |
| 6.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第七章 全文结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简历 | 第80页 |
