| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-19页 |
| 1.1 肠球菌基本特性简述 | 第14页 |
| 1.2 肠球菌的致病性 | 第14-15页 |
| 1.2.1 对人的致病性 | 第14页 |
| 1.2.2 对动物的致病性 | 第14-15页 |
| 1.2.3 引起人兽共患病 | 第15页 |
| 1.3 肠球菌的鉴定诊断 | 第15-17页 |
| 1.3.1 生理生化特性鉴定 | 第15页 |
| 1.3.2 分子生物学检测 | 第15-16页 |
| 1.3.3 肠球菌的血清学鉴定 | 第16-17页 |
| 1.4 肠球菌的毒力基因与毒力因子 | 第17页 |
| 1.5 肠球菌的耐药基因与耐药性 | 第17-18页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析 | 第19-27页 |
| 2.1 材料与方法 | 第19-21页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 病原菌的分离 | 第19页 |
| 2.1.4 生化鉴定 | 第19页 |
| 2.1.5 16S rRNA基因、毒力因子基因和耐药基因的扩增与分析 | 第19-21页 |
| 2.1.6 小鼠致病性试验 | 第21页 |
| 2.1.7 药敏试验 | 第21页 |
| 2.2 结果 | 第21-25页 |
| 2.2.1 病原菌分离 | 第21页 |
| 2.2.2 生化鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.3 16S rRNA扩增与序列分析 | 第22-23页 |
| 2.2.4 致病力试验结果 | 第23页 |
| 2.2.5 药敏试验结果 | 第23-24页 |
| 2.2.6 毒力因子基因和耐药基因的扩增结果 | 第24-25页 |
| 2.3 讨论 | 第25-27页 |
| 2.3.1 鉴定方法 | 第25页 |
| 2.3.2 屎肠球菌毒力基因与致病性 | 第25-26页 |
| 2.3.3 屎肠球菌耐药基因与耐药性 | 第26-27页 |
| 第三章 屎肠球菌荚膜多糖（CPS）的提取纯化及其多糖含量的测定 | 第27-33页 |
| 3.1 材料与方法 | 第27-29页 |
| 3.1.1 菌株 | 第27页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第27页 |
| 3.1.3 屎肠球菌培养条件的选择优化 | 第27-28页 |
| 3.1.4 屎肠球菌荚膜多糖的粗提 | 第28页 |
| 3.1.5 屎肠球菌荚膜多糖的纯化 | 第28-29页 |
| 3.1.6 苯酚-硫酸法测定荚膜多糖含糖量 | 第29页 |
| 3.2 结果 | 第29-32页 |
| 3.2.1 各种培养条件对屎肠球菌生长的影响 | 第29-30页 |
| 3.2.2 检测多糖的存在 | 第30页 |
| 3.2.3 纯化后荚膜多糖的含量及纯度 | 第30-32页 |
| 3.3 讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 屎肠球菌CPS与BSA偶联抗原的制备及其间接ELISA方法的尝试建立 | 第33-39页 |
| 4.1 材料 | 第33-34页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第33页 |
| 4.1.2 主要试剂和耗材 | 第33页 |
| 4.1.3 ELISA所用试剂的配制 | 第33-34页 |
| 4.2 实验方法 | 第34-35页 |
| 4.2.1 用ADH间桥法制备CPS-BSA偶联抗原 | 第34页 |
| 4.2.2 CPS-BSA偶联抗原的凝胶过滤层析纯化 | 第34页 |
| 4.2.3 CPS-BSA偶联抗原的鉴定 | 第34页 |
| 4.2.4 SDS-PAGE及琼扩试验 | 第34页 |
| 4.2.5 以偶联蛋白为包被抗原的羊源屎肠球菌间接ELISA方法的尝试建立 | 第34-35页 |
| 4.3 结果 | 第35-37页 |
| 4.3.1 CPS-BSA偶联抗原的鉴定 | 第35页 |
| 4.3.2 SDS-PAGE及琼扩试验 | 第35-36页 |
| 4.3.3 ELISA方法中抗原的最佳包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定 | 第36-37页 |
| 4.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第五章 羊源屎肠球菌胶原蛋白黏附素（ACM）基因克隆及分析 | 第39-44页 |
| 5.1 实验材料 | 第39页 |
| 5.1.1 主要仪器 | 第39页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 5.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 5.2.1 模板DNA提取 | 第39页 |
| 5.2.2 引物选择与合成 | 第39页 |
| 5.2.3 Acm基因扩增 | 第39-40页 |
| 5.2.4 重组质粒pUC57-Kan-Acm的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| 5.3 结果 | 第41-42页 |
| 5.3.1 Acm目的基因的扩增 | 第41页 |
| 5.3.2 重组质粒的PCR鉴定 | 第41页 |
| 5.3.3 Acm基因的序列测定 | 第41-42页 |
| 5.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第六章 羊源屎肠球菌胶原蛋白黏附素（ACM）的原核表达 | 第44-49页 |
| 6.1 实验材料 | 第44页 |
| 6.2 实验方法 | 第44页 |
| 6.3 实验结果 | 第44-48页 |
| 6.3.1 重组质粒pET32a-Acm的双酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 6.3.2 重组质粒pET32a-Acm的序列测定 | 第45页 |
| 6.3.3 重组质粒pET32a-Acm的诱导表达 | 第45-47页 |
| 6.3.4 重组蛋白的纯化 | 第47页 |
| 6.3.5 反应原性检测 | 第47-48页 |
| 6.4 讨论 | 第48-49页 |
| 第七章 以Acm蛋白为抗原的绵羊源屎肠球菌间接ELISA方法的建立 | 第49-60页 |
| 7.1 实验材料 | 第49页 |
| 7.1.1 主要试剂和仪器 | 第49页 |
| 7.1.2 ELISA所用试剂的配制 | 第49页 |
| 7.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 7.2.1 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定 | 第49-50页 |
| 7.2.2 最佳包被条件的筛选 | 第50页 |
| 7.2.3 最佳封闭液的选择 | 第50页 |
| 7.2.4 封闭条件的优化 | 第50页 |
| 7.2.5 待检血清孵育时间的优化 | 第50页 |
| 7.2.6 酶标二抗最佳稀释浓度的确定 | 第50页 |
| 7.2.7 酶标二体的作用时间 | 第50-51页 |
| 7.2.8 底物最佳的显色时间 | 第51页 |
| 7.2.9 临界值的确定 | 第51页 |
| 7.2.10 间接ELISA检测方法评价 | 第51页 |
| 7.2.11 临床样品检测 | 第51页 |
| 7.3 结果 | 第51-59页 |
| 7.3.1 抗原的最佳包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定 | 第51-52页 |
| 7.3.2 抗原最佳包被条件的确定 | 第52-53页 |
| 7.3.3 最佳封闭液的选择 | 第53页 |
| 7.3.4 最佳封闭时间的选择 | 第53页 |
| 7.3.5 血清最佳孵育时间 | 第53-54页 |
| 7.3.6 酶标二抗最佳稀释倍数 | 第54页 |
| 7.3.7 酶标二抗最佳作用时间 | 第54页 |
| 7.3.8 底物显色时间 | 第54-55页 |
| 7.3.9 临界值确定 | 第55页 |
| 7.3.10 间接ELISA检测方法性能评价 | 第55-57页 |
| 7.3.11 临床样品检测 | 第57-59页 |
| 7.4 讨论 | 第59-60页 |
| 第八章 全文结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简历 | 第72-73页 |
