| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩写词汇注释表 | 第10-17页 |
| 第1章 绪论 | 第17-27页 |
| 1.1 纤维素酶的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.1.1 纤维素酶降解理论的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.1.2 动物内源性纤维素酶的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.1.3 纤维素酶的分子生物学研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2 纤维素酶的应用 | 第21-23页 |
| 1.2.1 棉纺织行业 | 第21-22页 |
| 1.2.2 食品发酵中的应用 | 第22页 |
| 1.2.3 在能源工业中的应用 | 第22-23页 |
| 1.3 研究目的、背景与意义 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究的主要内容与方法 | 第24-25页 |
| 1.4.1 几种天牛源新纤维素酶基因的克隆与生物学分析 | 第24页 |
| 1.4.2 几种天牛源新纤维素酶的基因表达与纯化 | 第24页 |
| 1.4.3 几种天牛源纤维素酶N-糖基化位点分析 | 第24页 |
| 1.4.4 几种天牛源新纤维素酶性质的分析 | 第24页 |
| 1.4.5 黄星天牛中肠中内切葡聚糖酶的鉴定以及酶活分析 | 第24-25页 |
| 1.5 技术路线图 | 第25-27页 |
| 第2章 几种天牛源新纤维素酶基因c DNA克隆与生物信息学分析 | 第27-43页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.2.1 云斑天牛、黄星天牛、星天牛组织材料的获取 | 第27页 |
| 2.2.2 质粒、菌株、工具酶和其他材料 | 第27页 |
| 2.2.3 主要实验仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.2.4 生物信息学分析软件和网站 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第28-29页 |
| 2.3.2 黄星天牛、星天牛、云斑天牛总RNA的提取 | 第29页 |
| 2.3.3 采用 3’RACE扩增几种天牛源纤维素酶基因的 3’ 端序列 | 第29-32页 |
| 2.3.4 采用 5’ RACE扩增几种天牛源纤维素酶基因的 5’ 端序列 | 第32-35页 |
| 2.4 实验结果 | 第35-41页 |
| 2.4.1 3’ RACE结果 | 第35-36页 |
| 2.4.2 5’RACE结果 | 第36-37页 |
| 2.4.3 对几种天牛源纤维素酶的生物信息学分析 | 第37-41页 |
| 2.5 本章小结与讨论 | 第41-43页 |
| 第3章 重组蛋白在家蚕中表达与纯化体系的建立及性质的研究 | 第43-71页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-47页 |
| 3.2.1 实验家蚕品种与细胞 | 第43页 |
| 3.2.2 菌株、质粒、细胞系、工具酶和其他材料 | 第43-44页 |
| 3.2.3 试剂配方 | 第44-47页 |
| 3.2.4 主要实验仪器与设备 | 第47页 |
| 3.2.5 生物信息学分析软件和网站 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-58页 |
| 3.3.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| 3.3.2 各纤维素酶的供体质粒的构建 | 第48-50页 |
| 3.3.3 重组Bacmid的产生 | 第50页 |
| 3.3.4 重组Bacmid的鉴定 | 第50-52页 |
| 3.3.5 测序结果分析 | 第52页 |
| 3.3.6 Bacmid DNA的提取 | 第52页 |
| 3.3.7 昆虫细胞系的培养 | 第52-53页 |
| 3.3.8 Bacmid转染Bm N培养细胞 | 第53页 |
| 3.3.9 病毒的大量扩增 | 第53-54页 |
| 3.3.10 重组杆状病毒感染家蚕 | 第54页 |
| 3.3.11 SDS-PAGE | 第54页 |
| 3.3.12 Western-blot分析 | 第54-55页 |
| 3.3.13 重组蛋白的纯化 | 第55页 |
| 3.3.14 N-糖基化分析 | 第55-56页 |
| 3.3.15 刚果红平板染色法 | 第56页 |
| 3.3.16 纤维素酶活性的测定 | 第56-57页 |
| 3.3.17 纤维素酶性质的测定 | 第57页 |
| 3.3.18 薄层层析分析纤维素酶水解产物 | 第57-58页 |
| 3.4 结果与分析 | 第58-68页 |
| 3.4.1 各天牛源纤维素酶基因的体外扩增及供体质粒的构建 | 第58-59页 |
| 3.4.2 重组穿梭载体的构建及鉴定 | 第59-60页 |
| 3.4.3 带有His标签的各纤维素酶的重组蛋白的表达与纯化 | 第60-62页 |
| 3.4.4 Bh-EGase Ⅲ与Ph-EGase Ⅰ糖基化分析 | 第62-63页 |
| 3.4.5 Am-EGase Ⅲ、Bh-EGase Ⅲ、Bh-EGase Ⅰ、Ph-EGase Ⅰ的最适反应p H值 | 第63-64页 |
| 3.4.6 离子对纤维素酶的影响 | 第64-67页 |
| 3.4.7 薄层层析结果 | 第67-68页 |
| 3.5 本章小结与讨论 | 第68-71页 |
| 第4章 黄星天牛中肠中内切葡聚糖酶的鉴定与酶活性的测定 | 第71-81页 |
| 4.1 引言 | 第71页 |
| 4.2 实验材料 | 第71-73页 |
| 4.2.1 黄星天牛的采集 | 第71页 |
| 4.2.2 主要试剂与设备 | 第71-73页 |
| 4.3 实验方法 | 第73-74页 |
| 4.3.1 中肠总蛋白的提取 | 第73页 |
| 4.3.2 Cx酶分析 | 第73页 |
| 4.3.3 Cx酶带的胶回收及质谱分析 | 第73页 |
| 4.3.4 中肠内切葡聚糖酶的酶活力测定 | 第73-74页 |
| 4.3.5 中肠内切葡聚糖酶活性的研究 | 第74页 |
| 4.4 实验结果 | 第74-79页 |
| 4.4.1 Cx酶检测结果 | 第74-75页 |
| 4.4.2 LC-MS/MS结果分析 | 第75-77页 |
| 4.4.3 黄星天牛中肠内切葡聚糖酶种类的鉴定与分析 | 第77-78页 |
| 4.4.4 Cx酶的最适p H与温度 | 第78页 |
| 4.4.5 金属离子对内切葡聚糖酶的影响 | 第78-79页 |
| 4.5 本章小结与讨论 | 第79-81页 |
| 结论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
