| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表(Abbreviations) | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第12页 |
| 1.2 天然免疫在炎性反应中的作用 | 第12-13页 |
| 1.3 TLRs功能及其信号转导过程 | 第13-14页 |
| 1.4 信号转导因子NF-κB1（P50）的作用 | 第14-15页 |
| 1.5 miRNA及其对免疫的调控作用 | 第15-19页 |
| 1.5.1 miRNA的形成过程及作用机制 | 第15-16页 |
| 1.5.2 miRNA对免疫的调控作用 | 第16-19页 |
| 1.5.2.1 miRNA与先天性免疫 | 第16-17页 |
| 1.5.2.2 miRNA与适应性免疫 | 第17-18页 |
| 1.5.2.3 miRNA与炎症反应 | 第18-19页 |
| 1.6 miRNA对细胞周期的调控作用 | 第19-20页 |
| 1.7 miR-322 的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.7.1 miR-322 调控各种细胞的分化 | 第20-21页 |
| 1.7.2 miR-322 的其它生物学功能 | 第21页 |
| 1.8 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 试验材料 | 第22-25页 |
| 2.1 引物以及相关核苷酸序列 | 第22-24页 |
| 2.2 细胞、菌株及质粒 | 第24页 |
| 2.3 主要药品及试剂 | 第24-25页 |
| 2.4 主要培养基、缓冲液及其配制 | 第25页 |
| 2.5 抗体 | 第25页 |
| 3 实验方法 | 第25-33页 |
| 3.1 细胞培养 | 第25-26页 |
| 3.1.1 RAW264.7 细胞的培养 | 第25-26页 |
| 3.1.2 293T细胞的培养 | 第26页 |
| 3.2 LPS刺激RAW264.7，qPCR检测炎症因子以及细胞周期蛋白的表达情况 | 第26-27页 |
| 3.2.1 细胞总RNA的提取 | 第26页 |
| 3.2.2 反转录 | 第26-27页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR | 第27页 |
| 3.3 LPS刺激RAW264.7，qPCR检测miR-322 的表达情况 | 第27-28页 |
| 3.3.1 总RNA的提取 | 第27页 |
| 3.3.2 反转录 | 第27-28页 |
| 3.3.3 荧光定量PCR | 第28页 |
| 3.4 MTT法检测LPS对RAW264.7 增殖的影响 | 第28页 |
| 3.5 qPCR检测miR-322 对LPS介导的炎症因子及周期蛋白表达的影响 | 第28页 |
| 3.5.1 转染 | 第28页 |
| 3.5.2 细胞总RNA的提取 | 第28页 |
| 3.5.3 反转录 | 第28页 |
| 3.5.4 荧光定量PCR | 第28页 |
| 3.6 流式细胞术检测miR-322 对RAW264.7 细胞周期的影响 | 第28-29页 |
| 3.7 MTT法检测miR-322 对LPS介导的巨噬细胞增殖的影响 | 第29页 |
| 3.8 miR-322 靶基因预测 | 第29页 |
| 3.9 双荧光素酶报告实验 | 第29-31页 |
| 3.9.1 野生型荧光素酶载体及突变体的构建 | 第29-30页 |
| 3.9.2 结合位点突变 | 第30页 |
| 3.9.3 重组质粒与模拟物或者抑制剂共转染 293T细胞 | 第30页 |
| 3.9.4 荧光素酶活性检测 | 第30-31页 |
| 3.10 Western blot | 第31-32页 |
| 3.10.1 细胞转染 | 第31页 |
| 3.10.2 细胞总蛋白的提取及浓度测定 | 第31页 |
| 3.10.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第31-32页 |
| 3.10.4 转膜 | 第32页 |
| 3.10.5 封闭 | 第32页 |
| 3.10.6 抗体的杂交 | 第32页 |
| 3.10.7 显影 | 第32页 |
| 3.11 数据统计 | 第32-33页 |
| 4 结果分析 | 第33-45页 |
| 4.1 LPS对炎症因子及周期蛋白表达的影响 | 第33-34页 |
| 4.1.1 qPCR检测LPS对巨噬细胞炎性因子表达的影响 | 第33页 |
| 4.1.2 qPCR检测LPS对细胞周期蛋白mRNA表达的影响 | 第33-34页 |
| 4.2 MTT法检测LPS对RAW264.7 增殖的影响 | 第34-35页 |
| 4.3 LPS刺激RAW264.7，qPCR检测miR-322 的表达情况 | 第35-36页 |
| 4.4 miR-322 对LPS介导的炎症因子以及细胞周期蛋白mRNA水平的影响 | 第36-38页 |
| 4.4.1 qPCR检测miR-322 对LPS介导的炎症因子分泌的影响 | 第36-37页 |
| 4.4.2 qPCR检测miR-322 对LPS介导的细胞周期蛋白表达的影响 | 第37-38页 |
| 4.5 流式细胞术检测miR-322 对细胞周期的影响 | 第38页 |
| 4.6 MTT法检测miR-322 对LPS介导的巨噬细胞增殖的影响 | 第38-39页 |
| 4.7 miR-322 靶基因预测 | 第39页 |
| 4.8 miR-322 靶基因的验证 | 第39-45页 |
| 4.8.1 双荧光素酶野生型报告质粒的构建 | 第39-41页 |
| 4.8.2 双荧光素酶突变型报告质粒的构建 | 第41-42页 |
| 4.8.3 双荧光素酶报告实验 | 第42页 |
| 4.8.4 qPCR检测miR-322 对靶基因NF-κB1 mRNA表达的影响 | 第42-43页 |
| 4.8.5 western blot检测miR-322 对靶基因NF-κB1 蛋白表达的影响 | 第43-45页 |
| 5 讨论 | 第45-47页 |
| 5.1 miR-322 靶基因的预测 | 第45页 |
| 5.2 LPS可抑制mi R-322 的表达 | 第45-46页 |
| 5.3 miR-322 对NF-κB1 的调控作用研究 | 第46页 |
| 5.4 miR-322 通过抑制NF-κB1 的表达调控炎症反应 | 第46-47页 |
| 5.5 miR-322 促进巨噬细胞增殖 | 第47页 |
| 6 本研究得出的主要结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
