| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 1 引言 | 第14-44页 |
| ·体细胞核移植 | 第14-16页 |
| ·体细胞核移植的历史 | 第14页 |
| ·动物体细胞核移植即动物克隆的意义 | 第14-16页 |
| ·体细胞核移植存在的问题及研究现状 | 第16页 |
| ·哺乳动物体细胞核移植与重编程 | 第16-27页 |
| ·哺乳动物体细胞核移植与表观重编程 | 第16-26页 |
| ·体细胞核移植重编程中的端粒变化 | 第26-27页 |
| ·研究的基因 | 第27-37页 |
| ·Peg10 的研究现状及研究意义 | 第28-29页 |
| ·Peg3 的研究现状及研究意义 | 第29-31页 |
| ·Cdkn1c/p57Kip2 的研究现状及研究意义 | 第31页 |
| ·Xist 的研究现状及研究意义 | 第31-32页 |
| ·Dlk1 和Gtl2 的研究现状及研究意义 | 第32-34页 |
| ·H19 的研究现状及研究意义 | 第34-36页 |
| ·Igf2r 的研究现状及研究意义 | 第36-37页 |
| ·DNA 甲基化及其检测方法的综述 | 第37-43页 |
| ·甲基化敏感的限制性内切酶处理法 | 第38-39页 |
| ·基于重亚硫酸盐处理的方法 | 第39-42页 |
| ·与芯片技术相关的DNA 甲基化分析方法 | 第42-43页 |
| ·本研究的目的意义和研究内容 | 第43-44页 |
| ·研究的目的和意义 | 第43-44页 |
| ·研究的内容 | 第44页 |
| 2 研究一 绵羊 PEG10、XIST、PEG3 启动子区CPG 岛的克隆 | 第44-59页 |
| ·实验材料 | 第44-47页 |
| ·主要药品和试剂盒 | 第44-45页 |
| ·原材料及菌株 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·主要试剂的配制 | 第45-46页 |
| ·主要分子生物学软件及相关网站 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-52页 |
| ·引物设计及合成 | 第47页 |
| ·实验器皿的处理 | 第47页 |
| ·绵羊肝脏组织的处理 | 第47页 |
| ·绵羊肝脏基因组DNA 的提取 | 第47-48页 |
| ·绵羊肝脏总 RNA 的提取 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第49-50页 |
| ·CaCl_法制备感受态细胞 | 第50-51页 |
| ·A-T 克隆及热激转化 | 第51页 |
| ·阳性重组质粒鉴定 | 第51-52页 |
| ·实验结果 | 第52-57页 |
| ·合成的克隆引物 | 第52-53页 |
| ·绵羊肝脏总 RNA 的提取结果 | 第53-54页 |
| ·绵羊 Peg10 拟 DMR、Xist、Peg3 第一外显子RT-PCR 结果 | 第54页 |
| ·绵羊 Peg10、Xist、Peg3 启动子区及第一外显子的测序结果 | 第54-57页 |
| ·分析讨论 | 第57页 |
| ·结论 | 第57-59页 |
| 3 研究二 重亚硫酸盐测序法（BSP）和甲基化特异性 PCR 法（MSP）分析克隆绵羊印记相关基因的甲基化状态 | 第59-87页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·主要药品和试剂盒 | 第59页 |
| ·实验材料及处理 | 第59页 |
| ·主要仪器设备 | 第59页 |
| ·主要试剂的配制 | 第59-60页 |
| ·主要分子生物学软件及相关网站 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-65页 |
| ·研究基因启动子及第一外显子CpG 岛分析 | 第60页 |
| ·BSP 和MSP 引物设计 | 第60页 |
| ·绵羊基因组 DNA 提取 | 第60-61页 |
| ·基因组 DNA 的酶切处理及纯化 | 第61-62页 |
| ·基因组 DNA 的重亚硫酸盐处理 | 第62页 |
| ·重亚硫酸盐处理产物的纯化 | 第62-63页 |
| ·甲基化 PCR 扩增 | 第63-65页 |
| ·克隆绵羊各组织各基因 BSP 产物胶回收纯化 | 第65页 |
| ·BSP 产物A-T 克隆及菌落 PCR 鉴定阳性克隆 | 第65页 |
| ·阳性重组质粒提取 | 第65页 |
| ·阳性质粒测序 | 第65页 |
| ·实验结果 | 第65-81页 |
| ·克隆绵羊及对照各组织基因组DNA 提取结果 | 第65-66页 |
| ·绵羊8 个印记相关基因启动子及第一外显子CpG 岛的分析结果 | 第66-70页 |
| ·BSP 和MSP 引物设计结果 | 第70-71页 |
| ·重亚硫酸盐修饰产物PCR 扩增结果 | 第71-75页 |
| ·菌落 PCR 鉴定阳性重组结果 | 第75页 |
| ·阳性重组质粒提取结果 | 第75-76页 |
| ·克隆及对照绵羊各组织中印记相关基因的BSP 测序结果 | 第76-81页 |
| ·分析讨论 | 第81-87页 |
| ·结论 | 第87页 |
| 4 研究三 PEG10，DLK1、IGF2R 和 XIST 的 MRNA 表达分析 | 第87-95页 |
| ·实验材料 | 第87页 |
| ·主要仪器设备及药品 | 第87页 |
| ·实验材料 | 第87页 |
| ·实验方法 | 第87-88页 |
| ·绵羊 Peg10 和 Xist 部分cDNA 的克隆 | 第87-88页 |
| ·对照绵羊 N1、N2 和克隆 D1、D2 各组织总RNA 的提取 | 第88页 |
| ·半定量 RT-PCR 法检测Peg10、Xist、 Dlk1 和 Igf2r mRNA 在绵羊N1、N2各组织中的表达 | 第88页 |
| ·半定量 RT-PCR 法检测Peg10、Xist、 Dlk1 和 Igf21 mRNA 在克隆绵羊 D2各组织中的表达 | 第88页 |
| ·实验结果 | 第88-93页 |
| ·绵羊 Peg10 和 Xist cDNA 克隆引物 | 第88-89页 |
| ·绵羊各组织总 RNA 的提取结果及RT-PCR 结果 | 第89-90页 |
| ·绵羊 Peg10 和 Xist cDNA 克隆结果及其生物信息学分析 | 第90-92页 |
| ·对照绵羊 N1 各组织中Peg10、Xist、 Dlk1 和Igf21 mRNA 半定量RT-PCR检测结果 | 第92页 |
| ·克隆绵羊 D2 各组织中Peg10、Xist、 Dlk1 和Igf21 mRNA 半定量RT-PCR结果 | 第92-93页 |
| ·分析讨论 | 第93-94页 |
| ·结论 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-113页 |
| 作者简介 | 第113页 |
