| 摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-10页 |
| 引言 | 第14-17页 |
| 1 研究内容和技术路线 | 第17-20页 |
| 1.1 研究内容 | 第17-19页 |
| 1.1.1 分析胃癌相关circRNA表达谱并对胃癌相关circRNA进行验证 | 第17页 |
| 1.1.2 分析基于染料法RT-ddPCR的绝对定量法在检测circRNA时的可行性 | 第17页 |
| 1.1.3 建立基于染料法的RT-ddPCR多重检测方法 | 第17页 |
| 1.1.4 检测hsa_circ_0001017 和hsa_circ_0061276 在组织和血浆中的表达水平 | 第17-18页 |
| 1.1.5 分析血浆中circRNA的来源 | 第18页 |
| 1.1.6 初步探索细胞中circRNA的表达规律 | 第18页 |
| 1.1.7 Hsa_circ_0001017 和hsa_circ_0061276 作为胃癌标志物的可行性分析 | 第18页 |
| 1.1.8 过表达hsa_circ_0001017 质粒的构建 | 第18-19页 |
| 1.2 技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-36页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 细胞株和载体 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-36页 |
| 2.2.1 病例资料 | 第22-24页 |
| 2.2.2 样本的采集与保存 | 第24页 |
| 2.2.3 样本总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.4 PCR引物设计与合成 | 第25-26页 |
| 2.2.5 总RNA的逆转录 | 第26-27页 |
| 2.2.6 q RT-PCR检测组织和细胞样本来源的circRNA | 第27-28页 |
| 2.2.7 RT-dd PCR检测血浆和细胞培养上清液中的circRNA拷贝数 | 第28-29页 |
| 2.2.8 细胞培养 | 第29-31页 |
| 2.2.9 过表达质粒的构建 | 第31-34页 |
| 2.2.10 瞬时转染过表达质粒 | 第34-35页 |
| 2.2.11 统计分析 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-71页 |
| 3.1 胃癌相关circRNA表达谱的建立及候选circRNA的筛选 | 第36-44页 |
| 3.1.1 建立胃癌相关的组织circRNA表达谱 | 第36-39页 |
| 3.1.2 建立胃癌相关的血浆circRNA表达谱 | 第39-41页 |
| 3.1.3 构建circRNA-miRNA关联图 | 第41-42页 |
| 3.1.4 胃癌相关circRNA芯片的交集分析 | 第42-44页 |
| 3.2 组织circ RNA和血浆circ RNA的精确定量 | 第44-46页 |
| 3.3 血浆中GAPDH作为参照基因的可行性探讨 | 第46-48页 |
| 3.4 建立基于荧光染料法RT-dd PCR的多重circRNA检测方法 | 第48-50页 |
| 3.5 Hsa_circ_ 0001017、hsa_circ_0061276 和hsa_circ_0005556 在组织和血浆中的表达模式 | 第50-55页 |
| 3.5.1 Hsa_circ_ 0001017 和hsa_circ_0061276 在组织和血浆中的表达水平 | 第50-51页 |
| 3.5.2 分析不同circRNA表达模式下的样本分布情况 | 第51-53页 |
| 3.5.3 Hsa_circ_0005556 在组织中的表达水平 | 第53-55页 |
| 3.6 血浆中circRNA的来源分析 | 第55-57页 |
| 3.6.1 组织 -血浆中circRNA的表达水平关联性 | 第55-56页 |
| 3.6.2 细胞培养上清液实验探究血浆circRNA的来源 | 第56-57页 |
| 3.7 分析hsa_circ_0001017 和hsa_circ_0061276 与宿主基因的关联 | 第57-59页 |
| 3.8 分析hsa_circ_0001017 和hsa_circ_0061276 与胃癌患者临床病理因素之间的关系 | 第59-63页 |
| 3.9 联合ROC曲线检测hsa_circ_0001017 和hsa_circ_0061276 作为胃癌标志物的诊断效率 | 第63-65页 |
| 3.10 血浆中hsa_circ_0001017 和hsa_circ_0061276 表达水平作为预后指标的分析 | 第65-69页 |
| 3.10.1 通过生存曲线分析对患者进行预后评估 | 第65-67页 |
| 3.10.2 分析hsa_circ_0001017 和hsa_circ_0061276 作为预后独立预测因子的可行性 | 第67-69页 |
| 3.11 过表达载体的构建 | 第69-71页 |
| 3.11.1 Hsa_circ_0001017 过表达载体的构建 | 第69-70页 |
| 3.11.2 Hsa_circ_0001017 过表达载体在细胞内上调水平的检测 | 第70-71页 |
| 4 全文小结 | 第71-72页 |
| 讨论 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 在学 研究成果 | 第80-82页 |
| 附录A 缩略词 | 第82-84页 |
| 附录B 综述 肿瘤循环标志物：外泌体中的 circ RNA | 第84-92页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
