| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 Saccharothrix algeriensis NRRL B-24137简介 | 第11-14页 |
| 1.1.1 Saccharothrix algeriensis NRRL B-24137遗传学分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2 Saccharothrix algeriensis NRRL B-24137生理生化特性 | 第12-13页 |
| 1.1.3 Saccharothrix algeriensis NRRL B-24137的抑菌活性 | 第13-14页 |
| 1.2 Saccharothrix algeriensis NRRL B-24137的喂养实验 | 第14-15页 |
| 1.3 二硫吡咯酮类化合物 | 第15-16页 |
| 1.3.1 二硫吡咯酮类化合物的结构及种类 | 第15页 |
| 1.3.2 二硫吡咯酮类化合物的生物活性 | 第15-16页 |
| 1.4 Holomycin生物合成的研究 | 第16-18页 |
| 1.5 放线菌的遗传操作方法 | 第18-19页 |
| 1.5.1 接合转移 | 第18页 |
| 1.5.2 电转化 | 第18-19页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 实验用菌株 | 第20-21页 |
| 2.2 实验用质粒和引物 | 第21-23页 |
| 2.3 实验用培养基 | 第23-24页 |
| 2.4 试剂 | 第24-27页 |
| 2.4.1 分子生物学试剂 | 第24-25页 |
| 2.4.2 缓冲液和溶液 | 第25-27页 |
| 2.5 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.5.1 链霉菌培养及菌种保藏 | 第27页 |
| 2.5.2 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 2.5.3 脉冲场凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.5.4 提取链霉菌基因组DNA | 第28页 |
| 2.5.5 链霉菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第28-29页 |
| 2.5.6 Saccharothrix algeriensis NRRL B-24137基因组DNA提取 | 第29页 |
| 2.5.7 菌落原位杂交 | 第29-30页 |
| 2.5.8 接合转移 | 第30-31页 |
| 2.5.9 Cosmid文库建立 | 第31-35页 |
| 2.5.9.1 基因组DNA的Sau3AI部分酶切 | 第31页 |
| 2.5.9.2 DNA片段回收 | 第31-32页 |
| 2.5.9.3 载体处理 | 第32页 |
| 2.5.9.4 连接 | 第32-33页 |
| 2.5.9.5 包装 | 第33页 |
| 2.5.9.6 效价测定和文库阳性检测 | 第33页 |
| 2.5.9.7 文库的扩增和独立保存和混合 | 第33-35页 |
| 第三章 Saccharothrix algeriensis NRRLB-24137中二硫吡咯酮类化合物生物合成基因簇的克隆 | 第35-48页 |
| 3.1 结果与分析 | 第35-47页 |
| 3.1.1 硫氧还原蛋白还原酶基因特异性引物的设计 | 第35-36页 |
| 3.1.2 基因组文库的构建 | 第36-38页 |
| 3.1.3 通过PCR对文库进行筛选 | 第38-39页 |
| 3.1.4 阳性克隆子在白色链霉菌中的异源表达 | 第39-40页 |
| 3.1.5 通过菌落原位杂交对文库进行复筛 | 第40-41页 |
| 3.1.6 混合文库的建立及筛库 | 第41-44页 |
| 3.1.8 阳性克隆在变铅青链霉菌ZX1中的异源表达 | 第44页 |
| 3.1.9 二硫吡咯酮类化合物生物合成基因簇的序列分析 | 第44-47页 |
| 3.1.9.1 二硫吡咯酮类化合物生物合成基因簇的ORF分析 | 第44-45页 |
| 3.1.9.2 二硫吡咯酮类化合物生物合成基因簇的比较分析 | 第45-47页 |
| 3.2 讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 Saccharothrix algeriensis NRRL B-24137遗传操作系统的建立 | 第48-55页 |
| 4.1 结果与分析 | 第48-54页 |
| 4.1.1 Saccharothrix algeriensis NRRL B-24137抗生素敏感性的测定 | 第48-49页 |
| 4.1.2 Saccharothrix algeriensis NRRL B-24137的接合转移 | 第49-51页 |
| 4.1.2.1 培养基的选择 | 第49-50页 |
| 4.1.2.2 供受比的调整 | 第50页 |
| 4.1.2.3 热激温度 | 第50页 |
| 4.1.2.4 覆盖时间 | 第50-51页 |
| 4.1.2.5 镁离子浓度对接合转移的影响 | 第51页 |
| 4.1.3 使用携带有同源片段的质粒进行接合转移 | 第51-53页 |
| 4.1.4 Saccharothrix algeriensis NRRL B-24137电转化的尝试 | 第53-54页 |
| 4.1.4.1 电转化感受态的制备 | 第53-54页 |
| 4.1.4.2 电转化 | 第54页 |
| 4.2 讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 链霉菌SH-4的初步研究 | 第55-61页 |
| 5.1 | 第55-59页 |
| 5.1.1 链霉菌SH-4的生物活性测定 | 第55-56页 |
| 5.1.2 链霉菌SH-4的16S rDNA分析 | 第56-57页 |
| 5.1.3 链霉菌SH-4基因组中PKS/NRPS基因的扫描 | 第57-58页 |
| 5.1.4 链霉菌SH-4的抗性背景测定 | 第58-59页 |
| 5.1.5 链霉菌SH-4的接合转移 | 第59页 |
| 5.2 讨论 | 第59-61页 |
| 第六章 总结与展望 | 第61-62页 |
| 6.1 总结 | 第61页 |
| 6.2 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
