| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-25页 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌的致病性及耐药性 | 第10-11页 |
| 1.1.1 金黄色葡萄球菌 | 第10页 |
| 1.1.2 金黄色葡萄球菌的致病性 | 第10-11页 |
| 1.1.3 金黄色葡萄球菌的耐药性 | 第11页 |
| 1.2 细菌群体感应系统 | 第11-14页 |
| 1.2.1 细菌群体感应系统简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 金黄色葡萄球菌双组份信号转导系统 | 第12-14页 |
| 1.3 ArlRS双组份信号转导系统 | 第14-18页 |
| 1.4 实验技术简介 | 第18-23页 |
| 1.4.1 表达载体的构建 | 第18-19页 |
| 1.4.2 蛋白纯化及检测技术介绍 | 第19-22页 |
| 1.4.2.1 蛋白纯化技术 | 第19-21页 |
| 1.4.2.1.1 金属离子螯合层析 | 第19-20页 |
| 1.4.2.1.2 离子交换层析 | 第20-21页 |
| 1.4.2.1.3 凝胶过滤层析 | 第21页 |
| 1.4.2.2 蛋白检测技术 | 第21-22页 |
| 1.4.2.2.1 电泳技术 | 第21-22页 |
| 1.4.2.2.2 圆二色谱 | 第22页 |
| 1.4.3 定点突变 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究工作的内容及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 ArlR及ArlS表达载体的构建及蛋白的诱导表达 | 第25-31页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.2.1.1 菌株与质粒 | 第25页 |
| 2.2.1.2 培养基及缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.2.1.3 试剂及仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.2.2.1 ArlS_(CA)和ArlR表达载体的构建及蛋白的诱导表达 | 第27-28页 |
| 2.2.2.2 ArlS_(CA)和ArlR蛋白的表达 | 第28-29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-31页 |
| 2.3.1 ArlS_(CA)和ArlR表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.2 ArlS_(CA)和ArlR蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| 第三章 蛋白的分离纯化及活性检测 | 第31-43页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 材料与方法 | 第31-37页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 3.2.1.1 培养基及缓冲液 | 第31-33页 |
| 3.2.1.2 试剂及仪器 | 第33-34页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.2.2.1 金属离子螯合层析技术纯化蛋白 | 第34-35页 |
| 3.2.2.2 离子交换层析技术纯化ArlR蛋白 | 第35页 |
| 3.2.2.3 凝胶过滤层析技术纯化蛋白 | 第35页 |
| 3.2.2.4 圆二色谱检测ArlR蛋白二级结构 | 第35-36页 |
| 3.2.2.5 ArlS_(CA)蛋白激酶活性的检测 | 第36-37页 |
| 3.2.2.6 ArlS蛋白体外磷酸化ArlR蛋白 | 第37页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第37-43页 |
| 3.3.1 ArlR蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 3.3.2 ArlR蛋白二级结构的测定 | 第38-39页 |
| 3.3.3 ArlS_(CA)蛋白的纯化及激酶活性的测定 | 第39-41页 |
| 3.3.4 ArlS_(CA)蛋白激酶活性的研究 | 第41页 |
| 3.3.5 ArlS_(CA)蛋白的体外磷酸化作用 | 第41-43页 |
| 第四章 ArlS蛋白定点突变菌株的构建 | 第43-51页 |
| 4.1 引言 | 第43-44页 |
| 4.2 材料与方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.2.2.1 构建定点突变表达载体 | 第45-47页 |
| 4.2.2.2 表达纯化ArlS_(CA-G418A)和ArlS_(CA-G420A)蛋白 | 第47页 |
| 4.2.2.3 ArlS_(CA-G418A)和ArlS_(CA-G420A)蛋白激酶活性的测定 | 第47页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第47-51页 |
| 4.3.1 ArlS_(CA)蛋白定点突变表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.3.2 ArlS_(CA-G418A)和ArlS_(CA-G420A)蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 4.3.3 ArlS_(CA-G418A)和ArlS_(CA-G420A)蛋白激酶活性的测定 | 第49-51页 |
| 第五章 总结与展望 | 第51-53页 |
| 5.1 总结 | 第51页 |
| 5.2 展望 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-63页 |
| 附录A ArlS碱基序列 | 第58-59页 |
| 附录B ArlR碱基序列 | 第59页 |
| 附录C DNA凝胶回收操作步骤 | 第59-60页 |
| 附录D PCR纯化操作步骤 | 第60页 |
| 附录E 提取质粒操作步骤 | 第60-61页 |
| 附录F SDS-PAGE操作方法 | 第61-62页 |
| 附录G pProEX-HTa载体质粒图谱和多克隆位点信息 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
