| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-18页 |
| ·研究目的和意义 | 第10页 |
| ·马泰勒虫分类学地位研究现状 | 第10-13页 |
| ·国内外研究现状 | 第11-12页 |
| ·虫种分类学研究的意义 | 第12-13页 |
| ·马梨形虫诊断方法的研究现状 | 第13-18页 |
| ·病原组织学诊断 | 第13-14页 |
| ·免疫学诊断 | 第14-15页 |
| ·分子生物学诊断 | 第15-18页 |
| 第二章 基于18S rRNA 序列的马梨形虫分类学地位分析 | 第18-28页 |
| ·材料和方法 | 第19-24页 |
| ·虫株及主要试剂 | 第19页 |
| ·培养基的制备 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-24页 |
| ·结果 | 第24-25页 |
| ·18S rRNA 基因的扩增 | 第24页 |
| ·系统发育分析 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-28页 |
| 第三章 基于Hsp70 基因的马梨形虫分类学定位分析 | 第28-37页 |
| ·材料与方法 | 第29-31页 |
| ·虫株及试剂 | 第29页 |
| ·引物设计与合成 | 第29页 |
| ·目的基因的获得及克隆 | 第29-30页 |
| ·序列分析与系统发生树的建立 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-35页 |
| ·马泰勒虫Hsp70 基因的扩增 | 第31页 |
| ·系统发生树进化分析 | 第31-32页 |
| ·同源性分析 | 第32-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 马梨形虫病PCR 检测方法建立和应用 | 第37-45页 |
| ·材料和方法 | 第37-40页 |
| ·虫株与感受态菌株 | 第37-38页 |
| ·主要试剂及仪器设备 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·结果 | 第40-43页 |
| ·马梨形虫18S rRNA 基因片段的扩增 | 第40页 |
| ·PCR 灵敏度试验 | 第40-41页 |
| ·PCR 特异性试验 | 第41-43页 |
| ·田间样品的检测 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 基于EMA1 基因的马泰勒虫病ELISA 诊断方法的建立 | 第45-67页 |
| ·材料与方法 | 第46-48页 |
| ·载体和菌株 | 第46页 |
| ·工具酶和试剂 | 第46-47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·试验仪器 | 第47-48页 |
| ·试验方法 | 第48-56页 |
| ·引物设计原则 | 第48页 |
| ·引物的设计与合成 | 第48-49页 |
| ·目的片段的扩增 | 第49页 |
| ·目的基因的克隆 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的提取和鉴定 | 第50-52页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第52页 |
| ·目的片段与表达载体的连接转化 | 第52-53页 |
| ·重组表达质粒的提取与鉴定 | 第53页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第53页 |
| ·表达产物的检测 | 第53-55页 |
| ·重组表达产物的Western-blotting 检测 | 第55-56页 |
| ·马泰勒虫病的ELISA 诊断方法的建立 | 第56-60页 |
| ·阴性血清的制备 | 第56-57页 |
| ·阳性血清的制备 | 第57页 |
| ·重组抗原的纯化 | 第57-58页 |
| ·马泰勒虫EMA1 基因的重组抗原的间接ELISA 试验 | 第58-60页 |
| ·结果 | 第60-65页 |
| ·马泰勒虫 EMA1 基因的扩增 | 第60页 |
| ·系统发育进化分析 | 第60-61页 |
| ·基因表达产物的SDS-PAGE | 第61-62页 |
| ·EMA1 重组蛋白的纯化及SDS-PAGE 结果 | 第62-63页 |
| ·表达产物的Western-blotting | 第63页 |
| ·ELISA 最佳条件选择 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第六章 全文结论 | 第67-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
