| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-37页 |
| ·毕赤酵母高效表达脂肪酶的研究进展 | 第13-17页 |
| ·毕赤酵母表达系统的概述 | 第13页 |
| ·脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母的发酵策略 | 第14-16页 |
| ·毕赤酵母表达蛋白的纯化策略 | 第16-17页 |
| ·重组蛋白纯化的一般策略 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母表达重组脂肪酶的纯化策略 | 第17页 |
| ·脂肪酶在非水相催化的研究进展 | 第17-24页 |
| ·脂肪酶的概述 | 第17-18页 |
| ·脂肪酶的酶学特性 | 第18-21页 |
| ·脂肪酶的分子结构 | 第18-19页 |
| ·脂肪酶的催化机制 | 第19-20页 |
| ·脂肪酶的底物特异性 | 第20-21页 |
| ·脂肪酶在非水相界面的催化的应用 | 第21-22页 |
| ·脂肪酶的固定化 | 第22-24页 |
| ·固定化酶的概述 | 第22-24页 |
| ·脂肪酶的固定化研究 | 第24页 |
| ·非甾体手性药物的酶法拆分 | 第24-34页 |
| ·手性药物拆分的重要性 | 第24-25页 |
| ·手性拆分技术的应用 | 第25-28页 |
| ·手性色谱法 | 第26-27页 |
| ·物理结晶法 | 第27页 |
| ·化学拆分法 | 第27-28页 |
| ·酶法动力学拆分在手性拆分中的应用 | 第28页 |
| ·2-芳香丙酸类非甾体药物的酶法拆分 | 第28-30页 |
| ·萘普生的酶法拆分 | 第30-32页 |
| ·萘普生的不对称水解拆分 | 第30-31页 |
| ·萘普生的酯化拆分 | 第31-32页 |
| ·2-芳香丙酸类手性药物酶法拆分的影响因素 | 第32-34页 |
| ·有机溶剂 | 第32-33页 |
| ·水含量 | 第33页 |
| ·pH值 | 第33-34页 |
| ·添加剂 | 第34页 |
| ·温度 | 第34页 |
| ·本论文的研究思路及其主要内容 | 第34-37页 |
| 第2章 毕赤酵母表达扩展青霉TS414脂肪酶的发酵条件优化 | 第37-57页 |
| ·前言 | 第37-38页 |
| ·材料和方法 | 第38-39页 |
| ·菌种 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·仪器 | 第38-39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·培养基储液的配置 | 第39页 |
| ·酵母培养基 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·分光光度计法测定脂肪酶活力 | 第39-40页 |
| ·脂肪酶酶活单位定义 | 第40页 |
| ·酵母工程菌X33-TS414-lip发酵工艺优化 | 第40-42页 |
| ·摇瓶发酵培养基条件的优化 | 第40-41页 |
| ·不同起始pH培养基的影响 | 第40-41页 |
| ·不同接种量的影响 | 第41页 |
| ·不同甲醇浓度的影响 | 第41页 |
| ·摇瓶培养条件的优化 | 第41-42页 |
| ·不同摇瓶装量的影响 | 第41页 |
| ·不同摇床速度的影响 | 第41-42页 |
| ·不同温度的影响 | 第42页 |
| ·不同诱导时间的影响 | 第42页 |
| ·酵母工程菌X33-TS414-lip的罐上发酵 | 第42-44页 |
| ·HPLC法测定发酵液中甘油浓度 | 第42页 |
| ·变色酸法测定发酵液中甲醇浓度 | 第42-43页 |
| ·发酵罐种子培养液的制备 | 第43-44页 |
| ·一级菌种的制备 | 第43页 |
| ·二级菌种的制备 | 第43页 |
| ·上罐发酵 | 第43页 |
| ·菌体湿重的测定 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-54页 |
| ·酵母工程菌X33-TS414-lip发酵工艺优化 | 第44-48页 |
| ·不同起始pH培养基对脂肪酶表达的影响 | 第44-45页 |
| ·不同接种量对脂肪酶表达的影响 | 第45页 |
| ·不同甲醇浓度对脂肪酶表达的影响 | 第45-46页 |
| ·不同摇瓶装量对脂肪酶表达的影响 | 第46页 |
| ·不同摇瓶转速对脂肪酶表达的影响 | 第46-47页 |
| ·不同发酵温度对脂肪酶表达的影响 | 第47-48页 |
| ·诱导时间对脂肪酶表达的影响 | 第48页 |
| ·X33-TS414-lip产脂肪酶的罐上优化 | 第48-54页 |
| ·HPLC法检测发酵液中甘油浓度的标准曲线 | 第48-49页 |
| ·变色酸法检测发酵罐中发酵的甲醇浓度标准曲线 | 第49-50页 |
| ·三种不同的甲醇流加策略对罐上产脂肪酶的影响 | 第50-54页 |
| ·溶氧参数控制甲醇流加策略 | 第50-51页 |
| ·变色酸法维持低甲醇浓度策略 | 第51-53页 |
| ·甘油甲醇混合诱导过渡策略 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-57页 |
| 第3章 重组扩展青霉TS414脂肪酶的分离纯化 | 第57-69页 |
| ·前言 | 第57页 |
| ·材料与方法 | 第57-61页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57-58页 |
| ·仪器 | 第58页 |
| ·蛋白含量检测 | 第58-59页 |
| ·脂肪酶酶活检测及酶活单位定义 | 第59页 |
| ·SDS-PAGE电泳储液配制及分析方法 | 第59页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第59-60页 |
| ·Sephacryl S-100凝胶层析 | 第60页 |
| ·疏水层析 | 第60页 |
| ·超滤浓缩 | 第60页 |
| ·野生型TS414脂肪酶与重组TS414脂肪酶对萘普生拆分的比较 | 第60-61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-67页 |
| ·蛋白含量标准曲线 | 第61页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第61-63页 |
| ·Sephacryl S-100凝胶层析 | 第63-64页 |
| ·Phenyl Sepharose疏水层析 | 第64页 |
| ·重组脂肪酶的分离纯化结果 | 第64-66页 |
| ·超滤浓缩 | 第66-67页 |
| ·野生型TS414脂肪酶与重组型TS414脂肪酶酯化拆分萘普生的比较 | 第67页 |
| ·小结 | 第67-69页 |
| 第4章 重组扩展青霉TS414脂肪酶催化萘普生酯化拆分的研究 | 第69-91页 |
| ·前言 | 第69-70页 |
| ·材料和方法 | 第70-72页 |
| ·脂肪酶 | 第70页 |
| ·试剂 | 第70页 |
| ·实验仪器 | 第70-71页 |
| ·实验方法 | 第71-72页 |
| ·对照品的溶液的制备 | 第71页 |
| ·萘普生样品的制备 | 第71页 |
| ·萘普生丙酯的化学合成方法 | 第71页 |
| ·转化率和对映体选择率的计算方法 | 第71-72页 |
| ·酶粉的制备 | 第72页 |
| ·大孔吸附树脂的预处理 | 第72页 |
| ·脂肪酶的吸附固定化 | 第72页 |
| ·固定化脂肪酶酯化拆分萘普生的酶促反应 | 第72页 |
| ·结果与讨论 | 第72-88页 |
| ·萘普生酯化拆分HPLC分析检测方法的建立 | 第72-74页 |
| ·扩展青霉TS414脂肪酶固定化方法的优化 | 第74-79页 |
| ·固定化载体的筛选 | 第74-76页 |
| ·树脂与酶粉比例的影响 | 第76-77页 |
| ·吸附时间的影响 | 第77页 |
| ·pH值对固定化脂肪酶活性的影响 | 第77-78页 |
| ·冻干时间的影响 | 第78-79页 |
| ·固定化脂肪酶酯化拆分萘普生反应条件的优化 | 第79-88页 |
| ·摇床转速对固定化酶酯化拆分的影响 | 第79-80页 |
| ·温度对萘普生酯分拆分的影响 | 第80-81页 |
| ·有机溶剂对萘普生酯化拆分的影响 | 第81页 |
| ·底物醇对萘普生酯化拆分的影响 | 第81-82页 |
| ·均匀设计优化萘普生拆分反应体系 | 第82-85页 |
| ·外加水含量对萘普生酯化拆分的影响 | 第85-86页 |
| ·脂肪酶催化消旋萘普生拆分的时间曲线 | 第86页 |
| ·固定化酶的操作稳定性 | 第86-87页 |
| ·几种脂肪酶酯化拆分外消旋萘普生的比较 | 第87-88页 |
| ·小结 | 第88-91页 |
| 第5章 总结与展望 | 第91-95页 |
| ·创新点 | 第91页 |
| ·总结 | 第91-93页 |
| ·展望 | 第93-95页 |
| 附录1 | 第95-97页 |
| 附录2 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-109页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 个人简历 | 第113-114页 |
