| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-26页 |
| ·酶的体外改造 | 第10-18页 |
| ·理性进化 | 第10-12页 |
| ·非理性进化 | 第12-16页 |
| ·易错PCR | 第12-14页 |
| ·DNA重组 | 第14-15页 |
| ·交错延伸法 | 第15页 |
| ·随机引物体外重组法 | 第15页 |
| ·临时模板随机嵌合生长 | 第15-16页 |
| ·酵母胞内重组增强文库法 | 第16页 |
| ·渐进平截产杂合酶法 | 第16页 |
| ·高通量筛选 | 第16-18页 |
| ·表型筛选 | 第17页 |
| ·展示技术 | 第17-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第18-24页 |
| ·启动子 | 第19-20页 |
| ·载体 | 第20-21页 |
| ·宿主菌株 | 第21-22页 |
| ·提高外源蛋白表达策略 | 第22-24页 |
| ·选择合适的信号肽 | 第22-23页 |
| ·控制发酵过程参数 | 第23-24页 |
| ·实验目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 易错PCR定向进化扩展青霉FS1884碱性脂肪酶 | 第26-54页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·材料与方法 | 第26-36页 |
| ·实验材料 | 第26-30页 |
| ·菌种和质粒 | 第26页 |
| ·酶和实验药品 | 第26-27页 |
| ·常用仪器 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·试剂和缓冲液 | 第28-29页 |
| ·引物 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-36页 |
| ·pPIC3.5 K质粒的大量制备 | 第30页 |
| ·易错PCR获取突变脂肪酶基因 | 第30-31页 |
| ·突变脂肪酶重组表达载体构建 | 第31-32页 |
| ·获得脂肪酶基因随机突变库 | 第32-33页 |
| ·突变脂肪酶在毕赤酵母的表达 | 第33-34页 |
| ·突变脂肪酶的初筛 | 第34页 |
| ·突变脂肪酶的复筛 | 第34-35页 |
| ·突变脂肪酶理化性质鉴定 | 第35-36页 |
| ·实验结果与分析 | 第36-51页 |
| ·脂肪酶突变基因的制备 | 第36-37页 |
| ·脂肪酶突变基因表达载体的选择 | 第37页 |
| ·基因突变库的获得 | 第37-38页 |
| ·突变脂肪酶表达载体电击转化巴斯德毕赤酵母GS115 | 第38-40页 |
| ·线性化位点选择 | 第38-39页 |
| ·电击转化毕赤酵母GS115 | 第39-40页 |
| ·酵母转化子的初筛 | 第40-41页 |
| ·酵母转化子的复筛 | 第41-42页 |
| ·酶学性质初步分析 | 第42-51页 |
| ·野生型脂肪酶GS-PEL的酶学性质 | 第42-43页 |
| ·突变体GS-ep25-PEL的酶学性质 | 第43-45页 |
| ·突变体GS-ep10-PEL的酶学性质 | 第45-46页 |
| ·突变体GS-ep33-PEL的酶学性质 | 第46-48页 |
| ·突变体GS-ep43-PEL的酶学性质 | 第48-49页 |
| ·突变体GS-ep51-PEL的酶学性质 | 第49-50页 |
| ·突变体GS-ep81-PEL的酶学性质 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-54页 |
| 第三章 突变脂肪酶基因的克隆与测序 | 第54-68页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·材料与方法 | 第54-57页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·菌种和质粒 | 第54页 |
| ·酶和实验药品 | 第54页 |
| ·常用仪器 | 第54-55页 |
| ·培养基及试剂 | 第55页 |
| ·引物 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·酵母基因组简易提取 | 第55-56页 |
| ·突变脂肪酶基因的获得 | 第56页 |
| ·构建表达载体及转化 | 第56页 |
| ·阳性克隆子检测及目的片段测序 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-64页 |
| ·脂肪酶突变基因克隆 | 第57-58页 |
| ·表达载体转化及重组子验证 | 第58页 |
| ·突变脂肪酶序列分析 | 第58-64页 |
| ·突变脂肪酶GS-ep25-PEL | 第58-60页 |
| ·突变脂肪酶GS-ep10-PEL | 第60-61页 |
| ·突变脂肪酶GS-ep33-PEL | 第61-62页 |
| ·突变脂肪酶GS-ep43-PEL | 第62-64页 |
| ·小结与讨论 | 第64-68页 |
| 第四章 小结与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 个人简历 | 第82-83页 |