| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 概述 | 第13页 |
| 1.2 研究进展 | 第13-20页 |
| 1.2.1 PDH_C结构 | 第13-14页 |
| 1.2.2 基因定位 | 第14页 |
| 1.2.3 PDH_C的功能 | 第14-16页 |
| 1.2.4 PDH_C功能缺失与疾病 | 第16-20页 |
| 1.2.4.1 Leigh综合征 | 第17-18页 |
| 1.2.4.2 阿尔茨海默病 | 第18页 |
| 1.2.4.3 癫痫 | 第18页 |
| 1.2.4.4 肿瘤 | 第18-20页 |
| 1.3 小结 | 第20-21页 |
| 2 实验设计方案 | 第21-23页 |
| 2.1 实验目的与意义 | 第21页 |
| 2.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 2.3 技术线路图 | 第22-23页 |
| 第二章 哺乳细胞PDHE1α-pCMV6野生型与突变体表达载体的构建 | 第23-36页 |
| 1 实验材料 | 第23-24页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第23页 |
| 1.2 溶液配制 | 第23-24页 |
| 2 实验方法与结果 | 第24-35页 |
| 2.1 TG1感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.2 质粒的转化 | 第24页 |
| 2.3 质粒的提取 | 第24-25页 |
| 2.4 目的片段扩增 | 第25-28页 |
| 2.5 重组表达载体PDHE1α-pCMV6（WT）的构建 | 第28-30页 |
| 2.6 PDHE1α 突变体的构建 | 第30-35页 |
| 3 分析与讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 在HEK293T细胞中过表达PDHE1α 野生型与突变体 | 第36-45页 |
| 1 实验材料 | 第36-40页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第36页 |
| 1.2 溶液配制 | 第36-40页 |
| 2 实验方法与结果 | 第40-43页 |
| 2.1 实验方法 | 第40-42页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第40页 |
| 2.1.2 细胞传代 | 第40页 |
| 2.1.3 细胞分盘 | 第40页 |
| 2.1.4 转染 | 第40-41页 |
| 2.1.5 蛋白裂解液的制备 | 第41页 |
| 2.1.6 蛋白浓度测定 | 第41-42页 |
| 2.1.7 蛋白定量 | 第42页 |
| 2.1.8 蛋白样品的制备 | 第42页 |
| 2.1.9 Western blotting | 第42页 |
| 2.2 实验结果 | 第42-43页 |
| 3 分析与讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 点突变对PDHE1α 功能的影响 | 第45-53页 |
| 1 实验材料 | 第45页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第45页 |
| 1.2 主要溶液配制 | 第45页 |
| 2 实验方法与结果 | 第45-51页 |
| 2.1 酶活力测定 | 第45-47页 |
| 2.1.1 实验方法 | 第45页 |
| 2.1.2 实验结果 | 第45-47页 |
| 2.2 葡萄糖含量测定 | 第47-49页 |
| 2.2.1 实验方法 | 第47-48页 |
| 2.2.2 实验结果 | 第48-49页 |
| 2.3 乳酸含量测定 | 第49-50页 |
| 2.3.1 实验方法 | 第49页 |
| 2.3.2 实验结果 | 第49-50页 |
| 2.4 缺氧对PDHE1α 的影响 | 第50-51页 |
| 2.4.1 实验方法 | 第50页 |
| 2.4.2 实验结果 | 第50-51页 |
| 3 分析与讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 PDHE1α 突变体的模拟结构分析 | 第53-56页 |
| 1 实验材料 | 第53页 |
| 2 实验方法与结果 | 第53-54页 |
| 3 分析与讨论 | 第54-56页 |
| 第六章 PDHE1α 突变体稳定性分析 | 第56-60页 |
| 1 实验材料 | 第56页 |
| 2 实验方法与结果 | 第56-58页 |
| 2.1 免疫共沉淀（Co-IP） | 第56-57页 |
| 2.1.1 实验方法 | 第56页 |
| 2.1.2 实验结果 | 第56-57页 |
| 2.2 药物处理 | 第57-58页 |
| 2.2.1 实验方法 | 第57页 |
| 2.2.2 实验结果 | 第57-58页 |
| 3 分析与讨论 | 第58-60页 |
| 第七章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 硕士期间发表论文 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
