| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 英文缩略词 | 第17-18页 |
| 引言 | 第18-20页 |
| 第一部分 肺癌组织中miR-144和TIGAR表达水平及与患者临床特征间的相关性的分析 | 第20-41页 |
| 1 前言 | 第20页 |
| 2 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1 标本 | 第20-21页 |
| 2.2 引物 | 第21-22页 |
| 2.3 主要试剂和仪器设备 | 第22-24页 |
| 2.4 常用试剂配制 | 第24-25页 |
| 3 实验方法 | 第25-30页 |
| 3.1 qRT- PCR测定miR-144 和TIGAR m RNA的相对表达水平 | 第25-27页 |
| 3.2 Western blotting测定TIGAR蛋白的相对表达水平 | 第27-30页 |
| 3.3 统计学分析 | 第30页 |
| 4 实验结果 | 第30-37页 |
| 4.1 qRT-PCR检测miR-144 在肺癌组织中的相对表达水平 | 第30-31页 |
| 4.2 TIGARm RNA及TIGAR蛋白在肺癌组织中的相对表达水平 | 第31-32页 |
| 4.3 miR-144 和TIGAR的表达水平的相关性分析 | 第32页 |
| 4.4 肺癌患者临床病理学特征与miR-144 和TIGAR m RNA的表达水平分析 | 第32-37页 |
| 5 讨论 | 第37-38页 |
| 6 小结 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 第二部分 上调miR-144 表达对肺癌H460和A549细胞株生物学行为的影响 | 第41-75页 |
| 1 前言 | 第41页 |
| 2 实验材料 | 第41-46页 |
| 2.1 细胞株 | 第41-42页 |
| 2.2 细菌 | 第42页 |
| 2.3 实验动物 | 第42页 |
| 2.4 引物序列 | 第42页 |
| 2.5 慢病毒载体和慢病毒包装试剂 | 第42-43页 |
| 2.6 主要试剂 | 第43-44页 |
| 2.7 主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 2.8 主要溶液的配制 | 第45-46页 |
| 3 实验方法 | 第46-58页 |
| 3.1 制备miR-144 慢病毒表达载体 | 第46-50页 |
| 3.2 包装与制备慢病毒载体 | 第50-51页 |
| 3.3 慢病毒感染肺癌A549和H460细胞株 | 第51-53页 |
| 3.4 Western blotting检测三组细胞中TIGAR蛋白的表达水平 | 第53-54页 |
| 3.5 CCK-8 法检测肺癌细胞增殖能力 | 第54页 |
| 3.6 克隆形成实验检测细胞增殖能力 | 第54页 |
| 3.7 流式细胞术检测细胞凋亡情况 | 第54-55页 |
| 3.8 Hoechst染色检测细胞的凋亡 | 第55页 |
| 3.9 Caspase-3/7 活性检测 | 第55-56页 |
| 3.10 MDC染色检测肺癌细胞的自噬能力 | 第56页 |
| 3.11 Western blotting检测自噬相关蛋白 | 第56页 |
| 3.12 建立裸鼠移植瘤模型 | 第56-57页 |
| 3.13 统计分析 | 第57-58页 |
| 4 实验结果 | 第58-70页 |
| 4.1 慢病毒载体p GV-miR-144 的构建结果 | 第58页 |
| 4.2 慢病毒载体感染后细胞miR-144 的表达水平 | 第58-60页 |
| 4.3 重组miR-144 慢病毒感染肺癌细胞后对TIGAR蛋白表达的影响 | 第60页 |
| 4.4 慢病毒感染后细胞增殖能力检测结果 | 第60-62页 |
| 4.5 重组慢病毒感染后细胞凋亡检测结果 | 第62-66页 |
| 4.6 MDC染色检测肺癌细胞自噬结果 | 第66-67页 |
| 4.7 Western blotting检测自噬相关蛋白结果 | 第67-68页 |
| 4.8 裸鼠移植瘤实验结果 | 第68-70页 |
| 5 讨论 | 第70-72页 |
| 6 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-75页 |
| 第三部分miR-144 对TIGAR表达调控机制的初步研究 | 第75-108页 |
| 1 前言 | 第75页 |
| 2 实验材料 | 第75-80页 |
| 2.1 载体 | 第75-77页 |
| 2.2 细胞株 | 第77页 |
| 2.3 细菌 | 第77页 |
| 2.4 引物以及siRNA序列 | 第77-78页 |
| 2.5 实验试剂 | 第78-79页 |
| 2.6 实验设备 | 第79-80页 |
| 3 实验方法 | 第80-91页 |
| 3.1 预测miR-144 的靶基因 | 第80页 |
| 3.2 构建双报告基因载体 | 第80-86页 |
| 3.3 双荧光素酶报告实验 | 第86页 |
| 3.4 Restore实验 | 第86-88页 |
| 3.5 siRNA -TIGAR与过表达miR-144 的作用比较 | 第88-90页 |
| 3.6 统计分析 | 第90-91页 |
| 4 实验结果 | 第91-103页 |
| 4.1 miR-144 靶基因生物信息学预测 | 第91页 |
| 4.2 双荧光素酶报告载体的构建结果 | 第91-94页 |
| 4.3 双荧光素酶报告实验结果 | 第94-95页 |
| 4.4 Restore实验结果 | 第95-100页 |
| 4.5 A549细胞中siRNA-TIGAR转染与miR-144 过表达作用的比较 | 第100-103页 |
| 5 讨论 | 第103-105页 |
| 6 小结 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-108页 |
| 全文结论 | 第108-109页 |
| 综述一 | 第109-125页 |
| 参考文献 | 第119-125页 |
| 综述二 | 第125-131页 |
| 参考文献 | 第129-131页 |
| 个人简介 | 第131-132页 |
| 博士期间发表论文 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
