| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-24页 |
| 综述一 泛素的生物学功能研究进展 | 第15-20页 |
| 1.泛素分子简介 | 第15-16页 |
| 2.泛素蛋白酶体系统在生命活动中的意义 | 第16-20页 |
| 综述二 布鲁氏菌胞内生存机制研究进展 | 第20-24页 |
| 1.布鲁氏菌对细胞的侵袭 | 第20-22页 |
| 2.可能对布鲁氏菌胞内生存产生作用的因素 | 第22-24页 |
| 第二章 实验研究 | 第24-65页 |
| 实验一 布鲁氏菌侵染对于小鼠巨噬细胞中Nrdp1和SOCS-1 基因表达的影响 | 第24-31页 |
| 1.材料与方法 | 第25-28页 |
| ·细胞 | 第25页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·布鲁氏菌 16M的培养 | 第25页 |
| ·小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养 | 第25-26页 |
| ·羊种布鲁氏菌 16M侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7 | 第26-27页 |
| ·收集样品 | 第27页 |
| ·提取RNA并反转录 | 第27页 |
| ·实时荧光定量PCR检测Nrdp1和SOCS-1 的表达量 | 第27-28页 |
| ·统计学分析 | 第28页 |
| 2.结果 | 第28-30页 |
| ·基因的扩增曲线与熔解曲线分析 | 第28-29页 |
| ·Nrdp1和SOCS-1 表达量变化 | 第29-30页 |
| 3.讨论 | 第30-31页 |
| 实验二 小鼠Nrdp1和SOCS-1 基因在布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞中的作用探究 | 第31-54页 |
| 1 材料与方法 | 第32-39页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·菌种和细胞 | 第32页 |
| ·酶和试剂 | 第32页 |
| ·仪器 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-37页 |
| ·慢病毒干扰载体的构建 | 第32-36页 |
| ·慢病毒过表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·统计学分析 | 第37-38页 |
| ·小鼠基因Nrdp1和SOCS-1 在布鲁氏菌侵染小鼠细胞中的作用 | 第38-39页 |
| ·Bax、Bcl-2 和TNF-α的相对表达量 | 第38页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡率 | 第38页 |
| ·CFU计数 | 第38-39页 |
| 2. 实验结果 | 第39-52页 |
| ·PLL3.7-X（N1、N2、S1、S2）小鼠巨噬细胞干扰模型的构建 | 第39-41页 |
| ·干扰片段合链及双酶切PLL3.7 质粒载体结果 | 第39页 |
| ·293 FT细胞包装重组慢病毒 | 第39页 |
| ·重组慢病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7 干扰效果检测 | 第39-41页 |
| ·Plex-Nrdp1和Plex-SOCS-1 小鼠巨噬细胞过表达模型的构建 | 第41-42页 |
| ·PCR扩增Nrdp1和SOCS-1 基因以及双酶切Plex质粒载体 | 第41页 |
| ·实时荧光定量检测重组慢病毒在小鼠巨噬细胞RAW264.7 中的表达 | 第41-42页 |
| ·Nrdp1和SOCS-1 在布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞中的作用 | 第42-52页 |
| ·实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2 的相对表达量 | 第42-45页 |
| ·实时荧光定量PCR检测TNF-α的相对表达量 | 第45-46页 |
| ·CFU计数 | 第46-48页 |
| ·细胞凋亡率 | 第48-52页 |
| 3.讨论 | 第52-54页 |
| ·对布鲁氏菌胞内生存的讨论 | 第52-53页 |
| ·对宿主细胞凋亡情况的讨论 | 第53-54页 |
| 实验三 小鼠Nrdp1和SOCS-基因在布鲁氏菌侵染时对JAK/STAT信号通路的调控作用 | 第54-65页 |
| 1.材料与方法 | 第55-57页 |
| ·细胞 | 第55页 |
| ·菌株 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·仪器 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·布鲁氏菌 16M的培养 | 第55页 |
| ·小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养 | 第55页 |
| ·羊种布鲁氏菌 16M侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7 | 第55-56页 |
| ·收集样品 | 第56页 |
| ·提取RNA并反转录 | 第56页 |
| ·实时荧光定量PCR检测JAKs和STATs的相对表达量 | 第56-57页 |
| ·统计学分析 | 第57页 |
| 2.结果 | 第57-64页 |
| ·小鼠SOCS-1 基因在布鲁氏菌侵染时对JAK/STAT通路的调节 | 第57-60页 |
| ·小鼠Nrdp1基因在布鲁氏菌侵染时对JAK/STAT通路的调节 | 第60-64页 |
| 3. 讨论 | 第64-65页 |
| 第三章 实验结论 | 第65-66页 |
| 创新点 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录 | 第73-78页 |
| 附录一：康为世纪公司RNA提取试剂盒操作说明 | 第73页 |
| 附录二：康为世纪高纯度质粒小提试剂盒操作说明 | 第73-74页 |
| 附录三：康为世纪Hi Fi-MMLV cDNA第一链合成试剂盒操作说明 | 第74页 |
| 附录四：康为世纪快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒操作说明 | 第74-75页 |
| 附录五：E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第75页 |
| 附录六：转化E.coli DH5α 感受态细胞 | 第75-76页 |
| 附录七：天根生化科技（北京）有限公司无内毒素质粒大提试剂盒操作说明 | 第76页 |
| 附录八：百恩维生物科技有限公司高效转染试剂盒（HET）操作说明 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简介 | 第79-80页 |
| 导师评阅表 | 第80页 |
