摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-15页 |
缩略词 | 第15-17页 |
第一章 绪论 | 第17-25页 |
·KLF因子基因家族概述 | 第17页 |
·KLF基因家族保守性及进化分析 | 第17-19页 |
·KLF因子结构 | 第19-20页 |
·KLF因子作用机制及翻译后修饰 | 第20-21页 |
·KLF家族因子生物学功能 | 第21-25页 |
·KLF因子与细胞增殖 | 第22页 |
·KLF因子与细胞分化 | 第22-23页 |
·KLF因子与肿瘤发生 | 第23-25页 |
第二章 研究的目的和意义 | 第25-27页 |
第三章 实验材料 | 第27-33页 |
·细胞系 | 第27页 |
·实验树鼩 | 第27页 |
·质粒 | 第27页 |
·实验主要仪器如下表 | 第27-28页 |
·实验试剂与耗材见下表 | 第28-30页 |
·引物 | 第30-31页 |
·实验用抗体如表所示 | 第31-33页 |
第四章 实验方法 | 第33-49页 |
·细胞培养 | 第33-35页 |
·细胞复苏 | 第33页 |
·细胞传代(10cm dish) | 第33-34页 |
·细胞冻存 | 第34-35页 |
·组织RNA提取和cDNA合成 | 第35-36页 |
·组织样品的采集 | 第35页 |
·TRlzol法提组织样品总RNA | 第35页 |
·RT-PCR制备cDNA | 第35-36页 |
·cDNA片段的克隆与测序 | 第36-39页 |
·引物设计 | 第36页 |
·目的片段的制备 | 第36-37页 |
·切胶回收纯化目的DNA | 第37-38页 |
·目的DNA条带的T-A克隆 | 第38-39页 |
·重组质粒筛选,验证及测序 | 第39页 |
·RT-qPCR | 第39-41页 |
·RT-qPCR引物的设计 | 第39-40页 |
·RT-qPCR反应体系及反应程序 | 第40页 |
·引物特异性以及数值分析 | 第40-41页 |
·免疫印迹(western blotting) | 第41-46页 |
·WB实验相关溶液配制 | 第41-42页 |
·组织蛋白质提取及定量 | 第42-43页 |
·SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳 | 第43-44页 |
·转膜 | 第44-45页 |
·蛋白质检测 | 第45-46页 |
·免疫组化(IHC) | 第46-47页 |
·生物信息学分析方法 | 第47-49页 |
·KLF家族序列调取和数据收集 | 第47页 |
·序列多重比对和系统进化树构建 | 第47-48页 |
·结构域或功能域序列分析 | 第48-49页 |
第五章 结果 | 第49-79页 |
·树鼩KLF家族因子鉴定及特征 | 第49-52页 |
·树鼩KLF家族因子在进化上保守 | 第52-61页 |
·Ts-KLF家族锌指(ZF)结构域在结构上保守 | 第61-70页 |
·树鼩KLF因子CtBP结合结构域,Sin3A结合位点和核定位信号(NLS)分析 | 第70-72页 |
·Ts-KLF5翻译后修饰基序分析 | 第72-74页 |
·树鼩KLF家族在组织中的表达模式 | 第74-79页 |
第六章 讨论 | 第79-83页 |
第七章 结论 | 第83-85页 |
第八章 展望 | 第85-87页 |
第九章 综述 | 第87-105页 |
致谢 | 第105-107页 |
参考文献 | 第107-125页 |
附录 攻读硕士期间发表论文 | 第125页 |