| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| ·Leydig细胞分化研究进展 | 第12-17页 |
| ·Leydig细胞的分类及功能 | 第12-13页 |
| ·Leydig细胞的分化和功能的调控 | 第13-17页 |
| ·性腺功能减退症与Leydig细胞 | 第17-18页 |
| ·细胞移植治疗LOH的研究进展 | 第18-22页 |
| ·干细胞定向分化为睾丸间质细胞研究进展 | 第18-20页 |
| ·转录因子诱导成纤维细胞转分化为其它终末分化细胞研究进展 | 第20-22页 |
| ·本文的研究目标与研究内容 | 第22-25页 |
| ·ESCs定向诱导分化为Leydig细胞研究 | 第22-23页 |
| ·成纤维细胞转分化为Leydig细胞研究 | 第23-25页 |
| ·技术路线 | 第25-27页 |
| ·ESCs定向诱导分化为Leydig细胞研究技术路线 | 第25-26页 |
| ·成纤维细胞转分化为Leydig细胞及其转分化机制研究技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为Leydig细胞 | 第27-53页 |
| ·仪器与材料 | 第27-31页 |
| ·主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| ·实验小鼠 | 第28页 |
| ·细胞系 | 第28页 |
| ·细胞培养主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要抗体 | 第29页 |
| ·其它试剂 | 第29-30页 |
| ·Real-time PCR引物 | 第30页 |
| ·主要溶液的配制 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-40页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞的分离和冻存 | 第31-32页 |
| ·制备小鼠胚胎干细胞滋养层 | 第32-33页 |
| ·mESCs复苏与培养 | 第33页 |
| ·mESCs传代及冻存 | 第33-34页 |
| ·拟胚体（EB）制备 | 第34-35页 |
| ·EB分化培养 | 第35页 |
| ·过表达SF-1 基因的mESCs细胞株构建 | 第35页 |
| ·流式分选 | 第35-36页 |
| ·放射性免疫检测 | 第36页 |
| ·细胞免疫荧光 | 第36-37页 |
| ·细胞总蛋白裂解 | 第37页 |
| ·蛋白含量测定 | 第37页 |
| ·Western blotting检测 | 第37-38页 |
| ·细胞移植 | 第38页 |
| ·HE染色 | 第38-39页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第39-40页 |
| ·冰冻切片组织免疫荧光 | 第40页 |
| ·统计方法 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-51页 |
| ·ESCs-SF-1 细胞的形态学观察与鉴定 | 第40-42页 |
| ·体外诱导小鼠胚胎干细胞定向分化为睾丸间质前体细胞 | 第42-46页 |
| ·Leydig前体细胞移植至睾丸内发育为成熟Leydig细胞 | 第46-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第三章 成纤维细胞转分化为Leydig细胞及初步机制研究 | 第53-103页 |
| ·仪器与材料 | 第53-58页 |
| ·主要仪器与设备 | 第53-54页 |
| ·实验动物 | 第54页 |
| ·质粒、细胞及菌株 | 第54页 |
| ·分子克隆主要试剂 | 第54-55页 |
| ·细胞培养主要试剂 | 第55页 |
| ·主要抗体 | 第55页 |
| ·Real-time PCR引物 | 第55-56页 |
| ·RT-PCR引物 | 第56页 |
| ·其它试剂 | 第56-57页 |
| ·主要溶液配制 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-75页 |
| ·感受态制备 | 第58页 |
| ·pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 Vector质粒转化及克隆 | 第58-59页 |
| ·质粒提取 | 第59页 |
| ·RNA抽提 | 第59-60页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第60页 |
| ·RT-PCR反应 | 第60-61页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第61页 |
| ·双酶切反应 | 第61-62页 |
| ·克隆片段与载体连接 | 第62页 |
| ·连接产物转化 | 第62-63页 |
| ·重组子的PCR鉴定 | 第63页 |
| ·高纯度质粒抽提 | 第63-64页 |
| ·细胞复苏 | 第64页 |
| ·细胞传代培养 | 第64页 |
| ·细胞冻存 | 第64-65页 |
| ·病毒包装 | 第65页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）分离 | 第65-66页 |
| ·鼠尾成纤维细胞（TTFs）分离 | 第66-67页 |
| ·CYP11A1 promoter-mCherry慢病毒感染感染MEFs | 第67页 |
| ·转录因子慢病毒感染CYP11A1-mCherry-MEFs | 第67页 |
| ·候选转录因子筛选 | 第67页 |
| ·放射性免疫检测 | 第67-68页 |
| ·细胞免疫荧光 | 第68页 |
| ·细胞总蛋白裂解 | 第68-69页 |
| ·蛋白含量测定 | 第69页 |
| ·Western blotting检测 | 第69-70页 |
| ·细胞周期实验 | 第70页 |
| ·BrdU检测实验 | 第70-71页 |
| ·基因组DNA抽提 | 第71页 |
| ·DNA甲基化定量检测试剂盒（比色法） | 第71-72页 |
| ·表达谱芯片 | 第72-73页 |
| ·细胞移植 | 第73页 |
| ·HE染色 | 第73-74页 |
| ·冰冻切片组织免疫荧光 | 第74-75页 |
| ·统计方法 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-99页 |
| ·pLVX-EF1 alpha-IRES-ZsGreen1-Vector转化鉴定 | 第75页 |
| ·转分化转录因子筛选 | 第75-76页 |
| ·候选转录因子PCR扩增 | 第76-77页 |
| ·重组质粒PCR和鉴定 | 第77-78页 |
| ·慢病毒包装 | 第78-79页 |
| ·CYP11A1 promoter-mCherry-MEFs细胞构建及功能分析 | 第79-80页 |
| ·转分化候选转录因子最优组合筛选 | 第80-82页 |
| ·Dmrt1、Gata4和Nr5a1在转分化过程中的作用 | 第82-83页 |
| ·Dmrt1、Gata4和Nr5a1诱导小鼠成纤维细胞转分化为Leydig细胞 | 第83-86页 |
| ·iLCs表达谱分析 | 第86-88页 |
| ·DGN介导的转分化过程不依赖于有丝分裂 | 第88-89页 |
| ·DGN诱导成年小鼠成纤维细胞转分化为Leydig细胞 | 第89-92页 |
| ·iLCs移植恢复雄激素低下模型大鼠血清睾酮实验 | 第92-95页 |
| ·iLCs移植恢复雄激素低下模型小鼠血清睾酮验证实验 | 第95-98页 |
| ·成纤维细胞转化为Leydig细胞的初步机制研究 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-102页 |
| ·小结 | 第102-103页 |
| 第四章 结论与展望 | 第103-106页 |
| ·全文总结 | 第103页 |
| ·ESCs定向诱导分化为Leydig细胞研究总结 | 第103页 |
| ·成纤维细胞转分化为Leydig细胞研究总结 | 第103页 |
| ·创新点 | 第103-104页 |
| ·研究工作中待解决的问题 | 第104页 |
| ·ESCs定向诱导分化为Leydig细胞研究待解决问题 | 第104页 |
| ·成纤维细胞转分化为Leydig细胞研究待解决问题 | 第104页 |
| ·前景与展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-118页 |
| 附录 1 | 第118-119页 |
| 附录 2 | 第119-130页 |
| 英文缩略词表 | 第130-132页 |
| 攻读博士学位期间的科研论文情况 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
