| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| ·BMP信号通路 | 第10-12页 |
| ·BMPs | 第10-11页 |
| ·BMP受体 | 第11页 |
| ·Smad蛋白 | 第11页 |
| ·BMP信号跨膜转导 | 第11-12页 |
| ·斑马鱼作为模式生物的优点 | 第12-13页 |
| ·斑马鱼bmp2a基因 | 第13页 |
| ·斑马鱼生物钟 | 第13-14页 |
| ·bmp2a基因与松果体 | 第14-15页 |
| ·CRISPR-Cas9技术及在斑马鱼上的应用 | 第15-17页 |
| ·立题意义和主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-36页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·实验仪器 | 第18-19页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·常用试剂配制 | 第20-23页 |
| ·细菌培养基 | 第20页 |
| ·抗生素 | 第20页 |
| ·核酸电泳相关缓冲液 | 第20-21页 |
| ·Inoue法制备超级感受态细胞相关溶液 | 第21页 |
| ·原位杂交相关试剂 | 第21页 |
| ·Western Blot相关试剂 | 第21-22页 |
| ·茜素红硬骨染色相关试剂 | 第22-23页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·实验方法及设计 | 第24-36页 |
| ·斑马鱼交配产卵 | 第24页 |
| ·斑马鱼基因组的提取 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第25页 |
| ·胶回收 | 第25-26页 |
| ·胚胎总RNA的提取 | 第26页 |
| ·逆转录 | 第26-27页 |
| ·定量PCR以及制作标准曲线 | 第27页 |
| ·目的片段连接载体及酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·制备感受态细胞 | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·转化试验重组体的PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·质粒的提取(试剂盒) | 第29页 |
| ·显微注射 | 第29-30页 |
| ·原位杂交过程 | 第30-32页 |
| ·ChIP | 第32-33页 |
| ·细胞培养 | 第33-34页 |
| ·荧光素酶表达水平检测 | 第34页 |
| ·定点突变 | 第34页 |
| ·利用CRISPR-Cas9构建bmp2a斑马鱼突变体 | 第34-35页 |
| ·高通量深度测序 | 第35页 |
| ·斑马鱼幼鱼硬骨染色 | 第35页 |
| ·数据统计分析 | 第35-36页 |
| 第三章 实验结果及分析 | 第36-65页 |
| ·斑马鱼bmp2a基因受生物钟调控 | 第36-40页 |
| ·斑马鱼bmp2a基因振荡表达 | 第36-38页 |
| ·斑马鱼bmp2a基因受生物钟直接调控 | 第38-40页 |
| ·斑马鱼bmp2a基因受光照调控 | 第40-43页 |
| ·斑马鱼bmp2a基因的表达受光影响 | 第40-41页 |
| ·斑马鱼bmp2a基因直接被Tefa调控 | 第41-43页 |
| ·利用CRISPR-Cas9技术构建斑马鱼bmp2a基因的突变体 | 第43-45页 |
| ·CRISPR-Cas9位点的设计 | 第43页 |
| ·突变活性的鉴定以及bmp2a突变体的筛选 | 第43-45页 |
| ·斑马鱼bmp2a+/-高通量深度测序结果分析 | 第45-48页 |
| ·斑马鱼bmp2a突变体中的行为节律发生改变 | 第48-51页 |
| ·斑马鱼bmp2a突变体中的核心生物钟基因表达发生改变 | 第51-57页 |
| ·斑马鱼Bmp2a增强per2基因的表达 | 第57-60页 |
| ·拯救实验 | 第60-61页 |
| ·斑马鱼Bmp2a与其他per基因 | 第61-64页 |
| ·斑马鱼Bmp2a通过刺激per2表达调节生物钟 | 第64-65页 |
| 第四章 讨论和展望 | 第65-72页 |
| ·斑马鱼bmp2a突变体构建分析 | 第65页 |
| ·bmp2a缺失对斑马鱼生物钟影响 | 第65-66页 |
| ·斑马鱼Bmp2a增强per2基因的表达 | 第66-67页 |
| ·斑马鱼bmp2a+/-高通量深度测序结果分析 | 第67-69页 |
| ·生物钟与骨骼发育 | 第69-72页 |
| 第五章 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 研究生期间已发表和待发表的论文 | 第81-82页 |
| 附录 缩略词表 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
