| 中文摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 1 前言 | 第16-29页 |
| ·DnaJ蛋白研究进展 | 第16-23页 |
| ·DnaJ蛋白的结构、分类及多样性 | 第16-18页 |
| ·DnaJ蛋白在细胞中的分布及作用机制 | 第18-20页 |
| ·DnaJ蛋白在逆境胁迫中的功能 | 第20-23页 |
| ·非生物胁迫 | 第20-22页 |
| ·生物胁迫 | 第22-23页 |
| ·高温、干旱和病原菌对植物的影响 | 第23-26页 |
| ·高温对植物的影响 | 第23页 |
| ·干旱对植物的影响 | 第23-24页 |
| ·病原菌对植物的影响 | 第24-26页 |
| ·植物的真菌性病害 | 第25页 |
| ·植物的细菌性病害 | 第25-26页 |
| ·植物的病毒性病害 | 第26页 |
| ·植物对病原菌的防御 | 第26页 |
| ·卡尔文循环 | 第26-27页 |
| ·Rubisco分解代谢 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-60页 |
| ·实验材料 | 第29-33页 |
| ·植物材料 | 第29页 |
| ·材料的培养和处理 | 第29页 |
| ·菌株与质粒 | 第29-30页 |
| ·生化试剂及各种酶 | 第30页 |
| ·PCR引物 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31-33页 |
| ·实验方法 | 第33-60页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·反转录合成c DNA | 第34-35页 |
| ·SlCDJ2基因的分离与克隆 | 第35页 |
| ·目的片段回收 | 第35-36页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第36-39页 |
| ·连接反应 | 第36页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第37页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·正、反义表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·根癌农杆菌感受态的制备 | 第39页 |
| ·农杆菌转化 | 第39页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第39-40页 |
| ·SlCDJ2亚细胞定位 | 第40-43页 |
| ·SlCDJ2的GFP载体的构建 | 第40页 |
| ·拟南芥原生质体的分离提取 | 第40-42页 |
| ·瞬时转化原生质体 | 第42-43页 |
| ·SlCDJ2蛋白的原核诱导及纯化 | 第43-45页 |
| ·SlCDJ2原核载体的构建 | 第43页 |
| ·SlCDJ2蛋白的原核诱导 | 第43页 |
| ·SlCDJ2蛋白的纯化 | 第43-45页 |
| ·抗体的制备 | 第45页 |
| ·抗体效价的检测 | 第45页 |
| ·Western Blot分析 | 第45-48页 |
| ·SDS-PAGE | 第46页 |
| ·半干法转膜 | 第46-48页 |
| ·免疫反应 | 第48页 |
| ·显色反应 | 第48页 |
| ·农杆菌介导的番茄转化 | 第48-49页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第49-50页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第50-52页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·基因组水平的鉴定 | 第51页 |
| ·转录水平的鉴定 | 第51-52页 |
| ·蛋白水平的鉴定 | 第52页 |
| ·转基因番茄生理指标的测定 | 第52-57页 |
| ·叶绿体、类囊体膜和基质蛋白的分离 | 第52-53页 |
| ·CO2同化速率的测定 | 第53页 |
| ·卡尔文循环中关键酶活性测定 | 第53页 |
| ·Rubisco活化态测定 | 第53-54页 |
| ·蛋白水解酶的测定 | 第54页 |
| ·植物总蛋白的提取和western blot分析 | 第54页 |
| ·H_2O_2和O_2~(·?)的染色分析和定量测定 | 第54-55页 |
| ·叶片台盼蓝染色分析 | 第55页 |
| ·电解质外渗和膜脂过氧化程度的测定 | 第55页 |
| ·SOD和CAT活性的测定 | 第55-56页 |
| ·净光合速率的测定 | 第56页 |
| ·叶绿素荧光参数的测定 | 第56-57页 |
| ·叶绿素含量测定 | 第57页 |
| ·D1蛋白的提取和western blot分析 | 第57页 |
| ·酵母双杂交 | 第57-60页 |
| ·AD和BD表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·乙酸锂法制备酵母感受态细胞 | 第58页 |
| ·酵母感受态细胞的转化 | 第58-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-84页 |
| ·SlCDJ2基因的分离及其特征 | 第60-62页 |
| ·SlCDJ2基因全长c DNA序列的克隆 | 第60页 |
| ·SlCDJ2基因的核苷酸和氨基酸序列分析 | 第60-62页 |
| ·SlCDJ2蛋白的亚细胞定位 | 第62页 |
| ·SlCDJ2蛋白在叶绿体中的分布 | 第62-63页 |
| ·SlCDJ2基因在大肠杆菌中的表达 | 第63-64页 |
| ·p ET-SlCDJ2原核表达载体的构建 | 第63页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第63-64页 |
| ·SlCDJ2基因在番茄中的表达分析 | 第64-66页 |
| ·SlCDJ2基因在番茄不同组织器官中的表达 | 第64页 |
| ·SlCDJ2基因受高温诱导表达 | 第64-65页 |
| ·SlCDJ2基因受干旱、病原菌和信号分子的诱导表达 | 第65-66页 |
| ·SlCDJ2基因在番茄中的遗传转化 | 第66-68页 |
| ·SlCDJ2基因正反义表达载体的构建 | 第66-67页 |
| ·转SlCDJ2基因植株的鉴定 | 第67-68页 |
| ·过表达SlCDJ2基因增强了转基因番茄的高温抗性 | 第68-76页 |
| ·高温胁迫下转基因成苗的生长情况 | 第68-69页 |
| ·过表达SlCDJ2基因增强了转基因番茄耐高温机理分析 | 第69-76页 |
| ·过表达SlCDJ2基因维持了高温胁迫下较高的CO_2固定速率 | 第69-70页 |
| ·SlCDJ2有助于维持高温胁迫下Rubisco活性 | 第70-72页 |
| ·SlCDJ2有助于维持蛋白水解酶含量的稳定 | 第72-73页 |
| ·过表达SlCDJ2基因缓解了高温胁迫下ROS的积累 | 第73-74页 |
| ·过表达SlCDJ2基因缓解了高温胁迫诱导的细胞膜伤害 | 第74-75页 |
| ·SlCDJ2与Slcp Hsp70互作的酵母双杂交分析 | 第75-76页 |
| ·SlCDJ2基因在烟草中的遗传转化 | 第76-84页 |
| ·过表达SlCDJ2基因烟草的获得和鉴定 | 第76-77页 |
| ·过表达SlCDJ2基因增强了转基因烟草的干旱抗性 | 第77-82页 |
| ·干旱胁迫下幼苗生长情况 | 第77-78页 |
| ·过表达SlCDJ2基因增强了转基因烟草成苗的干旱抗性 | 第78-79页 |
| ·过表达SlCDJ2通过维持较高的SOD和APX活性来缓解ROS的积累 | 第79-81页 |
| ·过表达SlCDJ2基因缓解了干旱胁迫下的PSII的光抑制 | 第81-82页 |
| ·过表达SlCDJ2基因增强了转基因烟草对青枯病的抗性 | 第82-84页 |
| 4 讨论 | 第84-91页 |
| ·SlCDJ2基因编码一个叶绿体定位的Ⅲ型DnaJ蛋白 | 第84-85页 |
| ·过表达SlCDJ2基因增强了转基因番茄的高温抗性 | 第85-86页 |
| ·SlCDJ2有助于维持高温胁迫下Rubisco的活性 | 第86-87页 |
| ·SlCDJ2在高温胁迫中的作用机制 | 第87-89页 |
| ·过表达SlCDJ2基因增强了转基因烟草的干旱抗性 | 第89页 |
| ·过表达SlCDJ2基因增强了转基因烟草的病原菌抗性 | 第89-91页 |
| 5 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第102-103页 |
