| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1.前言 | 第13-25页 |
| ·海藻糖 | 第13-16页 |
| ·海藻糖的结构 | 第13页 |
| ·海藻糖的分布 | 第13-14页 |
| ·海藻糖的功能 | 第14-15页 |
| ·海藻糖提供碳源和能量 | 第14页 |
| ·在逆境状态下对细胞提供保护 | 第14-15页 |
| ·海藻糖作为生长调节物 | 第15页 |
| ·细菌细胞壁组成成分 | 第15页 |
| ·海藻糖的分解代谢 | 第15-16页 |
| ·海藻糖酶 | 第16-23页 |
| ·海藻糖酶概述 | 第16页 |
| ·海藻糖的分类 | 第16-18页 |
| ·海藻糖酶的分子结构 | 第18-19页 |
| ·海藻糖酶的作用机制 | 第19页 |
| ·海藻糖酶的功能 | 第19-23页 |
| ·真菌中海藻糖酶的功能 | 第19-21页 |
| ·植物中海藻糖酶的功能 | 第21-22页 |
| ·昆虫中海藻糖酶的功能 | 第22页 |
| ·动物中海藻糖酶功能 | 第22-23页 |
| ·海藻糖酶的基因的克隆和表达 | 第23页 |
| ·海藻糖酶的结构和突变研究 | 第23-24页 |
| ·海藻糖酶的应用 | 第24-25页 |
| ·海藻糖在食品中的潜在应用 | 第24页 |
| ·海藻糖酶在农业中的潜在应用 | 第24页 |
| ·海藻糖酶结构位点研究在农药中的应用 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第25页 |
| 2.材料与方法 | 第25-41页 |
| ·材料 | 第25-28页 |
| ·菌株与质粒 | 第25-26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·溶液 | 第26-28页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| ·海藻糖酶基因treZ的获得方法 | 第28-32页 |
| ·海洋细菌Zunongwangia sp.基因组DNA的抽提 | 第28-29页 |
| ·克隆treZ基因 | 第29页 |
| ·PCR产物纯化、回收与酶切 | 第29-30页 |
| ·碱裂解抽提细菌的质粒DNA | 第30页 |
| ·构建pGEX-6p-treZ重组表达载体 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第31页 |
| ·电转化 | 第31页 |
| ·检测阳性克隆子 | 第31-32页 |
| ·TreZ的表达与纯化 | 第32-34页 |
| ·感受态的制备 | 第32页 |
| ·treZ的诱导表达 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的配制 | 第32-33页 |
| ·TreZ蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第34页 |
| ·海藻糖酶的酶学性质 | 第34-37页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第34-35页 |
| ·海藻糖酶的酶活测定方法 | 第35-36页 |
| ·海藻糖酶的最适反应温度 | 第36页 |
| ·海藻糖酶的热稳定性 | 第36页 |
| ·海藻糖酶的最适pH | 第36页 |
| ·海藻糖酶的pH稳定性 | 第36页 |
| ·海藻糖酶的底物特异性 | 第36页 |
| ·金属离子和化合物对海藻糖酶的影响 | 第36-37页 |
| ·酶动力学性质的测定 | 第37页 |
| ·treZ基因随机突变体库的构建 | 第37-39页 |
| ·易错PCR扩增基因treZ | 第37页 |
| ·易错PCR产物的纯化、回收与酶切 | 第37-38页 |
| ·酶连 | 第38页 |
| ·电转化 | 第38页 |
| ·抽提重组质粒 | 第38页 |
| ·随机突变库的筛选方法 | 第38页 |
| ·突变株蛋白的诱导表达和纯化 | 第38-39页 |
| ·突变菌株的基本酶学性质测定 | 第39页 |
| ·突变型菌株的酶动力学常数 | 第39页 |
| ·定点突变 | 第39-40页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·定点饱和突变 | 第39-40页 |
| ·定点突变菌株的表达和纯化 | 第40页 |
| ·定点突变菌株的酶学性质 | 第40页 |
| ·酶的三维结构的模拟 | 第40-41页 |
| 3.结果与分析 | 第41-65页 |
| ·海洋细菌Zunongwangia sp.基因组DNA的提取 | 第41页 |
| ·PCR扩增treZ基因 | 第41-42页 |
| ·pGEX-6p-treZ重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·treZ基因及其蛋白序列分析 | 第43-44页 |
| ·TreZ蛋白的表达和纯化 | 第44-46页 |
| ·TreZ的酶学性质的分析 | 第46-52页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第46-47页 |
| ·酶的最适反应pH和pH耐受性 | 第47-48页 |
| ·酶的最适反应温度和热稳定性 | 第48-49页 |
| ·TreZ的底物特异性 | 第49页 |
| ·NaCl对海藻糖酶TreZ酶活的影响 | 第49-50页 |
| ·金属离子和化合物对海藻糖酶TreZ活性的影响 | 第50-51页 |
| ·TreZ的动力学参数测定 | 第51-52页 |
| ·treZ基因的随机突变库的构建 | 第52-59页 |
| ·易错PCR法扩增treZ基因 | 第52页 |
| ·易错PCR突变体库重组质粒的检测 | 第52-54页 |
| ·突变体库突变频率的分析 | 第54-55页 |
| ·高活性突变株的筛选 | 第55-56页 |
| ·突变型酶的诱导纯化表达 | 第56页 |
| ·突变体蛋白的酶学性质分析 | 第56-59页 |
| ·突变体的最适pH和pH稳定性 | 第56-57页 |
| ·突变体的最适温度和热稳定性 | 第57-59页 |
| ·突变体的酶动力学常数分析 | 第59页 |
| ·酶的结构模拟 | 第59-60页 |
| ·定点突变 | 第60-65页 |
| ·定点突变质粒的获得 | 第60-62页 |
| ·定点突变酶的诱导表达 | 第62页 |
| ·定点突变酶的最适pH和pH耐受 | 第62-63页 |
| ·定点突变酶的最适温度和热稳定性 | 第63-64页 |
| ·定点突变体的酶动力学分析 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-71页 |
| ·野生型海藻糖酶的TreZ的分析 | 第65-67页 |
| ·突变体的分析 | 第67-71页 |
| ·随机突变体的分析 | 第67-68页 |
| ·定点突变体的分析 | 第68-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |