| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 可控的蛋白质功能元件 | 第9-12页 |
| 1.2.1 可控蛋白质功能元件的调控 | 第9-10页 |
| 1.2.2 可控蛋白质功能元件的构建 | 第10-12页 |
| 1.3 胞苷脱氨酶 | 第12-17页 |
| 1.3.1 胞苷脱氨酶的性质 | 第12-15页 |
| 1.3.2 胞苷脱氨酶的应用 | 第15-16页 |
| 1.3.3 胞苷脱氨酶的活性鉴定 | 第16-17页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.1 实验方案 | 第17页 |
| 2.2 材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.2.1 载体与菌种 | 第17-18页 |
| 2.2.2 常用试剂 | 第18页 |
| 2.2.3 常用仪器 | 第18-19页 |
| 2.2.4 常用配方 | 第19-23页 |
| 2.2.5 构建在随位点插入外源片段的目的蛋白库 | 第23-25页 |
| 2.2.6 AID蛋白表达条件的确定 | 第25-27页 |
| 2.2.7 AID蛋白中耐受插入位点的鉴定 | 第27页 |
| 2.2.8 AID蛋白中插入位点的高通量测序 | 第27-28页 |
| 2.2.9 rpoB基因突变位点的分析 | 第28页 |
| 2.2.10 高活性AID蛋白插入突变体的筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.11 基于易错PCR的高活性AID蛋白突变体的筛选 | 第29-32页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第32-58页 |
| 3.1 体外转座反应条件的优化 | 第32-34页 |
| 3.1.1 MuDel-Plus转座子 | 第32-33页 |
| 3.1.2 载体质粒 | 第33-34页 |
| 3.1.3 转座条件的优化 | 第34页 |
| 3.2 外源片段的插入 | 第34-40页 |
| 3.2.1 转座子随机插入到供体载体 | 第35-36页 |
| 3.2.2 转座子随机插入到目的蛋白 | 第36-38页 |
| 3.2.3 外源片段随机插入到目的蛋白 | 第38-40页 |
| 3.3 AID蛋白表达条件的优化 | 第40-42页 |
| 3.3.1 IPTG浓度的优化 | 第40页 |
| 3.3.2 诱导时间的优化 | 第40-41页 |
| 3.3.3 AID蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 3.4 AID蛋白中耐受插入位点的筛选及高通量测序分析 | 第42-51页 |
| 3.4.1 随机插入突变体的活性鉴定 | 第42-45页 |
| 3.4.2 AID蛋白中耐受插入位点的筛选 | 第45-47页 |
| 3.4.3 同一种插入类型在不同插入位点的活性分析 | 第47-48页 |
| 3.4.4 C端对AID蛋白活性的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.5 插入突变体对rpoB基因的致突变分析 | 第49-51页 |
| 3.5 高活性AID蛋白突变体的筛选 | 第51-58页 |
| 3.5.1 高活性AID蛋白插入突变体的富集 | 第51-52页 |
| 3.5.2 易错PCR条件的优化 | 第52-55页 |
| 3.5.3 高活性的带有插入突变的AID蛋白易错PCR突变体的筛选 | 第55-58页 |
| 第4章 总结与讨论 | 第58-61页 |
| 总结 | 第58-59页 |
| 讨论与展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第75页 |
