| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-43页 |
| ·苏氨酸研究概述 | 第11-21页 |
| ·必需氨基酸简介 | 第11页 |
| ·苏氨酸的理化性质及生物合成途径 | 第11-16页 |
| ·苏氨酸的分解代谢 | 第16-17页 |
| ·苏氨酸的生理功能及需求量 | 第17-21页 |
| ·转基因动物概述 | 第21-37页 |
| ·转基因动物制备方法 | 第21-32页 |
| ·转基因动物的应用 | 第32-37页 |
| ·本课题研究进展及意义 | 第37-43页 |
| ·苏氨酸生产现状 | 第37-38页 |
| ·动物合成苏氨酸进展 | 第38-39页 |
| ·多顺反子载体构建 | 第39-41页 |
| ·本课题研究意义 | 第41-43页 |
| 第二章 材料和方法 | 第43-61页 |
| ·实验材料 | 第43-47页 |
| ·载体、菌株和细胞 | 第43页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43-44页 |
| ·实验试剂 | 第44-45页 |
| ·分析工具软件和网址 | 第45页 |
| ·常用试剂配制 | 第45-47页 |
| ·实验方法 | 第47-61页 |
| ·感受态细菌的准备(CaCl_2法) | 第47-48页 |
| ·感受态细菌效价测定 | 第48页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第48页 |
| ·质粒小量提取 | 第48-49页 |
| ·质粒大量提取 | 第49页 |
| ·融合PCR | 第49-50页 |
| ·PMD19-T vector连接 | 第50页 |
| ·限制性内切酶切割DNA | 第50-51页 |
| ·DNA片段的回收 | 第51页 |
| ·外源基因与载体的连接 | 第51-52页 |
| ·总RNA提取 | 第52页 |
| ·反转录和PCR扩增 | 第52-53页 |
| ·Western blot | 第53-55页 |
| ·转基因小鼠的制备 | 第55页 |
| ·鼠尾DNA提取 | 第55页 |
| ·Southern blot | 第55-57页 |
| ·细胞培养 | 第57-58页 |
| ·HPLC检测氨基酸浓度 | 第58-59页 |
| ·Inverse PCR | 第59-61页 |
| 第三章 实验结果 | 第61-95页 |
| ·苏氨酸合成相关基因在小鼠细胞中的表达和作用 | 第61-67页 |
| ·苏氨酸合成相关基因的密码子优化及合成 | 第61-63页 |
| ·天冬氨酸合成苏氨酸表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·载体在小鼠细胞中的表达分析 | 第64-66页 |
| ·载体在小鼠细胞中合成苏氨酸的作用分析 | 第66-67页 |
| ·小鼠细胞中以高丝氨酸为底物合成苏氨酸的分析 | 第67-71页 |
| ·以高丝氨酸为底物合成苏氨酸的分析 | 第67-68页 |
| ·以高丝氨酸为底物合成苏氨酸表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·载体在小鼠细胞中的表达分析 | 第69-70页 |
| ·载体在小鼠细胞中合成苏氨酸的作用分析 | 第70-71页 |
| ·小鼠细胞中以天冬氨酸为底物合成高丝氨酸的分析 | 第71-83页 |
| ·其他代谢途径在通路中的作用验证 | 第71-72页 |
| ·基因表达量在通路中的作用验证 | 第72-74页 |
| ·辅酶在通路中的作用验证 | 第74-80页 |
| ·单功能酶合成高丝氨酸的作用分析 | 第80-83页 |
| ·高丝氨酸合成苏氨酸通路在转基因小鼠中的表达和作用 | 第83-95页 |
| ·转基因小鼠模型的构建和鉴定 | 第83-85页 |
| ·转基因的表达分析 | 第85-88页 |
| ·苏氨酸在小鼠生长中的作用分析 | 第88-92页 |
| ·转基因的拷贝数及基因定位 | 第92-95页 |
| 第四章 分析和讨论 | 第95-101页 |
| ·载体的构建 | 第96页 |
| ·苏氨酸合成基因在小鼠细胞中的表达 | 第96-97页 |
| ·HPLC检测氨基酸浓度 | 第97页 |
| ·天冬氨酸合成高丝氨酸通路在小鼠细胞中的作用 | 第97-98页 |
| ·外源基因在转基因小鼠中的沉默 | 第98-101页 |
| 第五章 结论 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-115页 |
| 附录 | 第115-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
| 个人简介 | 第123页 |