| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| 1. 生物柴油概述 | 第10-11页 |
| 2 微藻油脂 | 第11-14页 |
| ·微藻油脂概述 | 第11页 |
| ·微藻油脂的形成机制 | 第11-12页 |
| ·细胞液中游离脂肪酸的合成 | 第11-12页 |
| ·游离脂肪酸进入内质网 | 第12页 |
| ·三酰甘油的合成 | 第12页 |
| ·影响微藻微生长和油脂积累的因素 | 第12-13页 |
| ·营养物 | 第13页 |
| ·CO_2 | 第13页 |
| ·温度 | 第13页 |
| ·光照 | 第13页 |
| ·生理状态 | 第13页 |
| ·微藻产油研究进展 | 第13-14页 |
| 3 基因功能研究方法概述 | 第14-16页 |
| ·基因转导技术 | 第14页 |
| ·RNA干扰(RNA interference,RNAi) | 第14-15页 |
| ·基因敲除与敲入 | 第15-16页 |
| ·反义技术 | 第16页 |
| 4 本研究选择的基因背景 | 第16-19页 |
| ·基因的来源 | 第16页 |
| ·基因生物信息学分析 | 第16-19页 |
| ·CrPOA1生物信息学分析 | 第16-17页 |
| ·CrUBC2生物信息学分析 | 第17-18页 |
| ·CrUBCc生物信息学分析 | 第18页 |
| ·CrWD40生物信息学分析 | 第18-19页 |
| 5 本实验研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 6 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 莱茵衣藻油脂代谢调控相关基因的RNAi研究 | 第21-43页 |
| 1 实验材料 | 第21-23页 |
| ·微藻与菌株 | 第21页 |
| ·使用的载体 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·实验所用引物 | 第21-22页 |
| ·实验所用培养基 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-30页 |
| 3 实验结果及分析 | 第30-41页 |
| ·莱茵衣藻CC425总RNA抽提和cDNA制备 | 第30-32页 |
| ·莱茵衣藻缺氮培养下CrPOA1、CrUBC2、CrUBCc、CrWD40基因mRNA水平分析 | 第30-31页 |
| ·莱茵衣藻缺磷培养下CrPOA1、CrUBC2、CrUBCc、CrWD40基因mRNA水平分析 | 第31-32页 |
| ·干涉片段扩增及测序 | 第32-33页 |
| ·反向重复序列的获得(中间载体的构建) | 第33页 |
| ·RNAi载体构建 | 第33-34页 |
| ·RNAi转化莱茵衣藻及其筛选 | 第34页 |
| ·转基因藻生物生物量和油脂含量检测 | 第34-39页 |
| ·生物量和油脂标准曲线的绘制 | 第34-35页 |
| ·转基因藻株在HSM培养下的油脂含量测定 | 第35-36页 |
| ·转基因藻株在HSM培养下的油脂含量测定 | 第36-39页 |
| ·qRT-PCR检测mRNA水平 | 第39-41页 |
| 4 结论与讨论 | 第41-43页 |
| ·结论 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·RNAi | 第41页 |
| ·CrPOA1、CrUBC2、CrUBCc和CrWD40对莱茵衣藻油脂积累的影响 | 第41-43页 |
| 第三章 莱茵衣藻油脂代谢调控相关基因的过量表达研究 | 第43-59页 |
| 1 实验材料 | 第43-44页 |
| ·微藻 | 第43页 |
| ·使用的载体 | 第43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·实验所用引物 | 第43-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-46页 |
| ·基因全长的克隆及测序 | 第44页 |
| ·基因过量表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·过量表达载体转化莱茵衣藻CC425及阳性克隆筛选 | 第45页 |
| ·过量表达转基因藻株生物量和油脂含量测定 | 第45页 |
| ·莱茵衣藻DNA提取 | 第45-46页 |
| ·过量表达转基因藻株PCR检测 | 第46页 |
| ·qRT-PCR检测 | 第46页 |
| 3 实验结果及分析 | 第46-56页 |
| ·基因全长的克隆 | 第46-47页 |
| ·基因全长的测序 | 第47页 |
| ·基因全长的测序分析 | 第47-49页 |
| ·过量表达载体构建 | 第49页 |
| ·过量表达载体转化莱茵衣藻及阳性藻株筛选 | 第49页 |
| ·过量表达转基因藻株生物量和油脂含量检测 | 第49-54页 |
| ·过量表达转基因藻株在HSM培养下的生物量检测 | 第49-50页 |
| ·过量表达转基因藻株在HSM培养下的油脂含量检测 | 第50-52页 |
| ·过量表达转基因藻株在HSM-N培养下的油脂检测 | 第52-54页 |
| ·过量表达藻株PCR检测 | 第54-55页 |
| ·qRT-PCR 检测 | 第55-56页 |
| ·转基因藻株过量表达效果检测 | 第55-56页 |
| ·基因过量表达后对油脂合成及调控主要基因的影响 | 第56页 |
| 4 结论及讨论 | 第56-59页 |
| ·结论 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| ·转基因阳性筛选 | 第57页 |
| ·基因对莱茵衣藻油脂合成代谢的调控 | 第57-59页 |
| 第四章 莱茵衣藻油脂代谢调控相关基因的亚细胞定位研究 | 第59-65页 |
| 1 实验材料 | 第59-60页 |
| ·实验植物材料 | 第59页 |
| ·实验仪器及药品 | 第59页 |
| ·实验所用到的引物 | 第59-60页 |
| 2 实验方法 | 第60-61页 |
| ·亚细胞定位载体构建 | 第60页 |
| ·农杆菌EHA105感受态细胞制备 | 第60页 |
| ·定位载体转化农杆菌EHA105及PCR鉴定 | 第60-61页 |
| 3 实验结果 | 第61-63页 |
| ·亚细胞定位载体构建 | 第61页 |
| ·亚细胞定位载体质粒转化农杆菌EHA105感受态及阳性克隆的PCR鉴定 | 第61-62页 |
| ·农杆菌EHA105侵染洋葱细胞及显微观察 | 第62-63页 |
| 4 结论及讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
