| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 前言 | 第12-20页 |
| 1 嗜水气单胞菌概述 | 第12页 |
| 2 嗜水气单胞菌对林蛙养殖业的危害及防治 | 第12-13页 |
| ·临床症状及病理变化 | 第12-13页 |
| ·防治 | 第13页 |
| 3 嗜水气单胞菌的诊断 | 第13-15页 |
| ·细菌学诊断 | 第13页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第13页 |
| ·间接荧光抗体技术 | 第13-14页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第14页 |
| ·环节导等温扩增检测技术 | 第14页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第14-15页 |
| ·胶体金诊断技术 | 第15页 |
| 4 嗜水气单胞菌疫苗的研究 | 第15-17页 |
| ·灭活苗 | 第15-16页 |
| ·活菌疫苗 | 第16页 |
| ·基因工程苗 | 第16-17页 |
| ·口服疫苗 | 第17页 |
| 5 嗜水气单胞菌的气溶素基因 | 第17-18页 |
| ·概述 | 第17-18页 |
| ·性质 | 第18页 |
| ·气溶素的致病性 | 第18页 |
| 6 本研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 材料与方法 | 第20-32页 |
| 1 材料 | 第20-23页 |
| ·菌种 | 第20页 |
| ·试剂及工具酶 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·试验所用主要试剂及培养基的配制 | 第21-23页 |
| 2 方法 | 第23-32页 |
| ·嗜水气单胞菌的培养 | 第23页 |
| ·DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24页 |
| ·目的基因Aer的PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物的纯化与回收 | 第25页 |
| ·目的基因Aer的克隆与鉴定 | 第25-26页 |
| ·Aer基因原核表达载体的构建与鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第27页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第27-28页 |
| ·表达产物的Western blotting分析 | 第28页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| ·纯化蛋白浓度的测定 | 第29页 |
| ·动物免疫前准备 | 第29页 |
| ·动物分组及免疫接种 | 第29-30页 |
| ·免疫小鼠血清ELISA抗体水平的检测 | 第30页 |
| ·免疫小鼠细胞免疫水平的初步检测 | 第30-31页 |
| ·数据处理 | 第31-32页 |
| 结果 | 第32-42页 |
| 1 目的基因Aer的PCR扩增 | 第32页 |
| 2 重组克隆质粒pMD18-T-Aer的PCR及酶切鉴定 | 第32-35页 |
| 3 Aer基因原核表达的鉴定 | 第35-38页 |
| ·重组质粒pGEX-Aer的PCR及酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·pGEX-Aer的序列测定 | 第36-38页 |
| 4 重组表达质粒pGEX-Aer的诱导表达 | 第38页 |
| 5 融合蛋白的Western blotting分析 | 第38-39页 |
| 6 融合蛋白的纯化及浓度测定 | 第39-40页 |
| 7 免疫小鼠血清的ELISA抗体检测结果 | 第40-42页 |
| ·各免疫组小鼠抗体水平的检测 | 第40-41页 |
| ·小鼠T淋巴细胞增殖试验结果 | 第41-42页 |
| 讨论 | 第42-44页 |
| 1. 蛋白的纯化 | 第42页 |
| 2 抗嗜水气单胞菌pGEX-Aer融合蛋白多抗的制备 | 第42-43页 |
| 3. MTT法检测淋巴细胞的增殖水平 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51-52页 |
| 附录 | 第52页 |
