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棉花农杆菌介导的转基因体系建立

摘要第1-6页
Abstract第6-8页
缩略语表第8-9页
目录第9-13页
研究的目的和意义第13-14页
1 文献综述第14-27页
   ·棉花组织培养的研究进展第14页
   ·影响棉花组织培养再生主要因素第14-17页
     ·基因型第14-15页
     ·外植体的选择第15-17页
       ·子叶节为外植体诱导丛生芽和以茎尖为受体的转化体系第15-16页
       ·农杆菌介导的转化花粉授粉后进而获得转化植株第16-17页
     ·激素第17页
   ·棉花遗传转化常用的方法第17-21页
     ·农杆菌介导法第17-20页
     ·花粉管通道法第20页
     ·基因枪法第20-21页
     ·其他方法第21页
   ·棉花转基因的研究进展第21-25页
     ·棉花抗虫基因工程研究进展第21-22页
     ·棉花纤维品质改良的研究进展第22-25页
   ·棉花纤维发育相关 SM 基因的简介第25-27页
2 以新陆早 45 号下胚轴为外植体再生体系的建立第27-34页
   ·实验材料第27页
   ·培养基第27-28页
     ·苗培养基(1/2MS)第27页
     ·愈伤组织诱导培养基第27页
     ·胚性愈伤组织诱导培养基(YP)第27-28页
     ·分化培养基(YF)第28页
     ·生根培养基(F5)第28页
   ·实验方法第28-29页
     ·外植体的制备第28页
     ·愈伤组织的诱导与继代第28页
     ·胚性愈伤组织的诱导第28页
     ·分化培养第28-29页
     ·生根培养第29页
     ·再生苗的嫁接第29页
   ·结果与分析第29-32页
     ·不同激素组织对愈伤组织的诱导第29-31页
     ·胚性愈伤组织的诱导与分化第31页
     ·生根培养及嫁接成活第31-32页
   ·讨论第32-34页
3 农杆菌介导新陆早 33 号胚性愈伤组织的转化体系建立第34-46页
   ·实验材料第34页
   ·实验试剂第34-37页
     ·SDS 碱裂解法提取质粒 DNA 所需试剂第34-35页
     ·棉花基因组 DNA 提取所需试剂第35页
     ·电泳缓冲液第35-36页
     ·细菌培养基第36页
     ·胚性愈伤转化培养基第36页
     ·抗生素第36-37页
   ·实验仪器第37页
   ·菌株第37页
   ·实验方法第37-41页
     ·质粒 DNA 的提取第37-38页
     ·农杆菌感受态的制备及转化第38页
       ·农杆菌感受态的制备第38页
       ·采用冻融法将含有目的基因的质粒转化至农杆菌第38页
     ·菌液的制备第38-39页
     ·农杆菌介导转化棉花胚性愈伤组织第39页
     ·转化后材料的分子鉴定第39-40页
       ·胚性愈伤组织和转基因植株的 DNA 提取(CTAB 法)第39-40页
       ·胚性愈伤组织和转基因植株的 PCR 检测第40页
     ·阳性植株的移栽及抗性鉴定第40-41页
   ·结果第41-44页
     ·受体胚性愈伤组织的选择第41页
     ·抗性胚性愈伤组织的获得和植株再生第41-42页
     ·抗性胚性愈伤的分子检测第42页
     ·转基因植株的分子检测第42-44页
     ·嫁接第44页
   ·讨论第44-46页
     ·关于受体胚性愈伤组织的状态第44-45页
     ·关于农杆菌的侵染第45页
     ·转基因植株后代的鉴定第45-46页
4 以成熟胚为受体转基因体系的建立第46-60页
   ·实验材料第46页
   ·实验仪器第46页
   ·培养基第46-48页
     ·成熟胚转化培养基第46-47页
     ·细菌培养基第47页
     ·GUS 染液配制第47-48页
     ·载体和菌株第48页
   ·方法第48-52页
     ·转基因棉花叶片 DNA 提取步骤第48-49页
     ·GUS 组织化学检测的步骤第49页
     ·农杆菌介导棉花成熟胚的转化第49-50页
     ·不同转化条件的设计第50-51页
       ·液浓度梯度的设计第50页
       ·不同侵染时间的比较第50页
       ·表面活性剂的应用第50页
       ·棉花基因型的筛选第50-51页
       ·抗生素浓度的筛选第51页
     ·生根培养第51-52页
   ·结果与分析第52-57页
     ·不同菌液浓度的比较第52页
     ·不同侵染时间的比较第52页
     ·表面活性剂的影响第52页
     ·棉花基因型对转化效率的影响第52-55页
     ·抗生素浓度对转化效率的影响第55页
     ·生根培养第55页
     ·PCR 检测结果第55页
     ·kan 叶片喷施第55-57页
   ·讨论第57-60页
     ·关于农杆菌侵染条件第57页
     ·关于表面活性剂的作用第57-58页
     ·关于棉花基因型第58页
     ·关于抗生素第58页
     ·转基因材料后代分析第58-60页
5 结论与展望第60-61页
参考文献第61-66页
个人简介第66-67页
致谢第67页

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