| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-27页 |
| ·微生物脂肪酶简介 | 第11-12页 |
| ·微生物脂肪酶结构及作用机理 | 第12-13页 |
| ·微生物脂肪酶的应用 | 第13-22页 |
| ·油脂化工及食品工业中的应用 | 第15-17页 |
| ·环境保护中的应用 | 第17-18页 |
| ·医学应用 | 第18-20页 |
| ·日常用品加工中的应用 | 第20-22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第22-24页 |
| ·表达载体 | 第22-23页 |
| ·宿主菌 | 第23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统特点 | 第23-24页 |
| ·多拷贝外源基因在毕赤酵母表达系统中的应用 | 第24-26页 |
| ·多拷贝基因的整合 | 第24-25页 |
| ·提高基因拷贝数方法 | 第25-26页 |
| ·本文的研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-38页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·菌株、质粒 | 第27页 |
| ·常用缓冲液 | 第27-28页 |
| ·常用分子制剂及商品化试剂盒 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-38页 |
| ·质粒DNA的抽提、大肠杆菌DH5α感受态细胞制备及热击转化 | 第28页 |
| ·构建重组表达质粒 | 第28-29页 |
| ·多拷贝表达框重组表达质粒构建——同尾酶法 | 第29-31页 |
| ·目的基因毕赤酵母系统表达 | 第31-32页 |
| ·毕赤酵母诱导表达产物脂肪酶活性测定—分光光度法 | 第32-34页 |
| ·多拷贝酵母菌株目的基因mRNA转录水平检测——荧光定量PCR | 第34-38页 |
| 3 结果 | 第38-52页 |
| ·产脂肪酶菌株HS-L16脂肪酶基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·HS-L16菌株脂肪酶基因LIP16的酵母诱导表达 | 第39-42页 |
| ·多拷贝目的基因表达框重组质粒构建及表达 | 第42-48页 |
| ·含双拷贝表达框质粒构建 | 第42-45页 |
| ·含四拷贝表达框质粒构建 | 第45-46页 |
| ·多拷贝重组质粒酵母表达 | 第46-48页 |
| ·多拷贝菌株目的基因表达水平比较 | 第48-50页 |
| ·多拷贝菌株目的基因表达框整合稳定性 | 第50-52页 |
| 4 分析与讨论 | 第52-55页 |
| ·HS-L16脂肪酶基因毕赤酵母表达 | 第52-53页 |
| ·多拷贝重组质粒构建及毕赤酵母表达 | 第53-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 硕士期间发表论文 | 第61页 |
| 衷心感谢以下基金资助 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
