| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-29页 |
| ·国内外燃料乙醇研究现状 | 第9-11页 |
| ·国外乙醇发展状况 | 第9-10页 |
| ·我国的乙醇发展状况 | 第10-11页 |
| ·发酵法生产乙醇的研究 | 第11-15页 |
| ·发酵法生产燃料乙醇的原料 | 第11页 |
| ·燃料乙醇的发酵工艺 | 第11-15页 |
| ·酿酒酵母代谢工程研究 | 第15页 |
| ·酿酒酵母乙醇及甘油的代谢 | 第15-21页 |
| ·酿酒酵母的乙醇代谢 | 第15-17页 |
| ·酿酒酵母的甘油代谢 | 第17-18页 |
| ·甘油的运输 | 第18-20页 |
| ·消耗NADH的谷氨酸的生物合成 | 第20-21页 |
| ·酿酒酵母菌株改造策略 | 第21-27页 |
| ·基因工程、代谢工程和合成生物学 | 第22-24页 |
| ·随机诱变与进化工程 | 第24-25页 |
| ·基因组重排与有性重组 | 第25-27页 |
| ·本论文的研究内容及目的 | 第27-29页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第29-50页 |
| ·实验材料 | 第29-36页 |
| ·质粒菌株与引物 | 第29-32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·主要溶液 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-50页 |
| ·大肠杆菌细胞感受态制备 | 第36页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第36-37页 |
| ·小规模提取大肠杆菌质粒法（CTAB法） | 第37页 |
| ·PCR扩增反应 | 第37-38页 |
| ·DNA的限制酶消化 | 第38页 |
| ·DNA连接反应 | 第38-39页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第39页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第39-40页 |
| ·酵母细胞的转化方法 | 第40页 |
| ·酵母染色体的快速分离 | 第40页 |
| ·验证酵母交配型 | 第40-41页 |
| ·酵母等位基因的分离及遗传分析 | 第41-42页 |
| ·酵母细胞不同交配型间的杂交 | 第42页 |
| ·产孢及四分体孢子拆分 | 第42页 |
| ·酵母EMS诱变 | 第42-43页 |
| ·酿酒酵母高效生孢 | 第43页 |
| ·酿酒酵母孢子纯化 | 第43页 |
| ·一步基因置换法 | 第43-44页 |
| ·两步基因置换法 | 第44-45页 |
| ·玉米面发酵培养基的配置 | 第45-46页 |
| ·玉米水解清液培养基的配置 | 第46页 |
| ·酵母的扩大培养与接种 | 第46页 |
| ·玉米面浓醪（VHG）发酵 | 第46页 |
| ·发酵液中主要代谢物的HPLC分析 | 第46-47页 |
| ·Dilution实验 | 第47页 |
| ·酿酒酵母mRNA的提取 | 第47-48页 |
| ·qRT-PCR法测定基因mRNA水平 | 第48页 |
| ·玻璃珠法提取酿酒酵母总蛋白（用于酶活测定） | 第48页 |
| ·蛋白质浓度的定量（Bio-Rad 方法） | 第48-49页 |
| ·酿酒酵母甘油-3-磷酸脱氢酶GPDH活力测定 | 第49-50页 |
| 第三章 部分缺失GPD1 基因启动子对降低甘油产量和浓醪发酵的影响 | 第50-66页 |
| ·质粒及菌株构建 | 第50-53页 |
| ·质粒构建 | 第50-52页 |
| ·菌株构建 | 第52-53页 |
| ·GPD1 启动子部分缺失对GPD1 基因mRNA水平的影响 | 第53-54页 |
| ·GPD1 启动子部分缺失对菌株渗透压抗性的影响 | 第54-56页 |
| ·GPD1 部分缺失启动子的整合与URA3 基因的恢复 | 第56-58页 |
| ·LE34U和LE35U的GPD1 基因表达及蛋白活性分析 | 第58-62页 |
| ·LE34U和LE35U浓醪发酵 | 第62-64页 |
| ·本章小结 | 第64-66页 |
| 第四章 以LE34U与LE35U为基础进一步提高乙醇发酵能力的尝试 | 第66-87页 |
| ·ADH2 基因缺失对发酵的影响 | 第66-70页 |
| ·质粒的构建 | 第66-67页 |
| ·LE34U和LE35U中ADH2 基因的缺失及浓醪发酵能力比较 | 第67-70页 |
| ·LE34U与LE35U双倍体构建与发酵 | 第70-73页 |
| ·LE34U与LE35U双倍体的构建 | 第70页 |
| ·各菌株单倍体和双倍体浓醪发酵能力比较 | 第70-73页 |
| ·外加甘油和乙酸对发酵的影响 | 第73-80页 |
| ·外加甘油对LE34U和LE35U发酵的影响 | 第73-75页 |
| ·培养基中加入乙酸对发酵的影响 | 第75-80页 |
| ·驯化并部分恢复GPD1 基因表达对菌株发酵的影响 | 第80-86页 |
| ·本章小结 | 第86-87页 |
| 第五章 通过化学诱变与染色体重组的方法提高酿酒酵母乙醇产量的研究 | 第87-97页 |
| ·W303D中STE2 等位基因的缺失 | 第87-89页 |
| ·双倍体菌株W303D-ste2 的EMS诱变 | 第89-90页 |
| ·单倍体突变菌株的发酵试验 | 第90-92页 |
| ·双倍体菌株WS1D和WS5D的构建和发酵能力分析 | 第92-95页 |
| ·本方法的主要优缺点 | 第95-96页 |
| ·本章小结 | 第96-97页 |
| 第六章 总结与展望 | 第97-100页 |
| ·总结 | 第97-98页 |
| ·展望 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-108页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
