| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-24页 |
| 第一章 哺乳动物体内精卵融合机制的研究进展 | 第13-21页 |
| 1. 哺乳动物的精卵融合机制 | 第13-17页 |
| ·精卵识别 | 第13-15页 |
| ·顶体反应 | 第15页 |
| ·精卵融合 | 第15-17页 |
| 2. 精卵融合的分子基础 | 第17-20页 |
| ·卵膜表面分子 | 第17页 |
| ·精子表面分子 | 第17-20页 |
| 3. 精卵融合的生物学意义 | 第20-21页 |
| 第二章 赤道素Eqtn的研究进展 | 第21-24页 |
| 1. Eqtn的基本概况 | 第21-23页 |
| ·Eqtn的发现 | 第21页 |
| ·Eqtn的定位 | 第21-23页 |
| 2. Eqtn的研究意义 | 第23-24页 |
| 第二部分 研究论文 | 第24-77页 |
| 第一章 绵羊Eqtn cDNA的克隆及生物信息学分析 | 第24-45页 |
| 前言 | 第24-26页 |
| 1. 材料与方法 | 第26-36页 |
| ·试验动物 | 第26页 |
| ·仪器与试剂 | 第26-28页 |
| ·实验仪器 | 第26-27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·克隆载体 | 第27页 |
| ·菌种 | 第27页 |
| ·试剂配制 | 第27页 |
| ·器具处理 | 第27-28页 |
| ·引物的合成与保存 | 第28页 |
| ·特异性引物的设计与合成 | 第28页 |
| ·引物的保存和稀释 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-35页 |
| ·绵羊睾丸组织总RNA提取 | 第28-29页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第29页 |
| ·β-actin检测模板 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·回收PCR产物 | 第31-32页 |
| ·目的片段与T-载体的连接 | 第32页 |
| ·转化与筛选 | 第32-34页 |
| ·重组质粒T-Eqtn的鉴定 | 第34-35页 |
| ·Eqtn基因的生物信息学分析 | 第35-36页 |
| ·结构预测与功能分析 | 第35页 |
| ·分子系统进化分析 | 第35-36页 |
| 2. 结果 | 第36-44页 |
| ·绒山羊与绵羊睾丸组织总RNA的提取与鉴定 | 第36页 |
| ·绒山羊与绵羊cDNA的β-actin检测 | 第36页 |
| ·绒山羊Eqtn cDNA全长的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·分析测序结果 | 第38-39页 |
| ·测序结果 | 第38页 |
| ·核酸序列比对 | 第38-39页 |
| ·氨基酸序列比对 | 第39页 |
| ·绵羊Eqtn基因的生物信息学分析 | 第39-44页 |
| ·结构预测与功能分析 | 第39-40页 |
| ·分子系统进化分析 | 第40-44页 |
| 3. 讨论 | 第44-45页 |
| 第二章 重组蛋白GST-Eqtn蛋白的原核表达及纯化 | 第45-61页 |
| 前言 | 第45-46页 |
| 1. 材料与方法 | 第46-55页 |
| ·仪器与试剂 | 第46-48页 |
| ·实验仪器 | 第46页 |
| ·实验试剂 | 第46-47页 |
| ·常用试剂配制 | 第47-48页 |
| ·菌种 | 第48页 |
| ·载体 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-55页 |
| ·引物设计与合成 | 第48页 |
| ·扩增目的片段 | 第48-49页 |
| ·电泳鉴定及产物回收 | 第49页 |
| ·构建重组质粒PGEX-Eqtn | 第49-50页 |
| ·融合蛋白GST-Eqtn的原核表达 | 第50页 |
| ·融合蛋白GST-Eqtn的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白GST-Eqtn的Western Bloting鉴定 | 第51-52页 |
| ·融合蛋白GST-Eqtn的纯化与浓缩 | 第52-53页 |
| ·Bardford法测定纯化蛋白的浓度 | 第53-55页 |
| 2. 结果 | 第55-60页 |
| ·目的片段的克隆与回收 | 第55页 |
| ·构建过渡载体T-Eqtn | 第55-56页 |
| ·构建表达载体PGEX-Eqtn | 第56页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第56-57页 |
| ·融合蛋白GST-Eqtn的原核表达与纯化 | 第57页 |
| ·融合蛋白GST-Eqtn的Western Bloting检测 | 第57-58页 |
| ·融合蛋白GST-Eqtn的Bardford法浓度测定结果 | 第58-60页 |
| 3. 讨论 | 第60-61页 |
| 第三章 小鼠抗绒山羊GST-Eqtn腹水多克隆抗体的制备与检测 | 第61-69页 |
| 前言 | 第61-62页 |
| 1. 材料与方法 | 第62-67页 |
| ·实验动物 | 第62页 |
| ·仪器与试剂 | 第62-63页 |
| ·实验仪器 | 第62页 |
| ·实验材料 | 第62-63页 |
| ·细胞 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-67页 |
| ·腹水瘤细胞S180的培养 | 第63页 |
| ·小鼠抗Eqtn多克隆抗体的制备与鉴定 | 第63-64页 |
| ·自制多克隆抗体的蛋白特异性检测 | 第64-65页 |
| ·自制多克隆抗体效价测定 | 第65-67页 |
| 2. 结果 | 第67-68页 |
| ·小鼠抗GST-Eqtn腹水多克隆抗体的鉴定 | 第67页 |
| ·小鼠抗GST-Eqtn腹水多克隆抗体的效价测定 | 第67-68页 |
| 3. 讨论 | 第68-69页 |
| 第四章 对绵羊睾丸组织及绵羊精子中Eqtn蛋白的定位检测 | 第69-77页 |
| 前言 | 第69-70页 |
| 1. 材料与方法 | 第70-74页 |
| ·实验动物 | 第70页 |
| ·仪器与试剂 | 第70-71页 |
| ·实验仪器 | 第70页 |
| ·实验材料 | 第70页 |
| ·常用试剂配制 | 第70-71页 |
| ·实验方法 | 第71-74页 |
| ·绵羊睾丸组织石蜡切片的制作 | 第71-72页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第72页 |
| ·顶体反应前后Eqtn在精子中的定位 | 第72-74页 |
| 2. 结果 | 第74-76页 |
| ·Eqtn蛋白在绵羊精子中的定位 | 第74-75页 |
| ·Eqtn蛋白在睾丸组织中的定位 | 第75-76页 |
| 3. 讨论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 读硕士期间参与的科研项目与发表的论文 | 第81页 |
