| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-22页 |
| ·流感病毒概述 | 第13-16页 |
| ·流感病毒分子生物学 | 第13-14页 |
| ·流感病毒感染机制 | 第14-16页 |
| ·TMPRSS2概述 | 第16-18页 |
| ·TMPRSS2的结构 | 第16-17页 |
| ·TMPRSS2对流感病毒HA的切割活化 | 第17-18页 |
| ·逆转录病毒载体概述 | 第18页 |
| ·逆转录病毒分子生物学 | 第18页 |
| ·逆转录病毒载体系统 | 第18页 |
| ·细胞培养型流感疫苗研究进展 | 第18-21页 |
| ·细胞作为病毒培养基质的优点 | 第18-19页 |
| ·细胞培养型流感疫苗发展现状 | 第19-20页 |
| ·细胞培养型流感疫苗发展前景 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 稳定表达TMPRSS2基因的MDCK细胞系的建立 | 第22-33页 |
| ·材料和方法 | 第22-27页 |
| ·细胞和质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第22页 |
| ·实验室DH5α感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·引物设计和合成 | 第23页 |
| ·Calu-3细胞总RNA的提取及cDNA的合成 | 第23-24页 |
| ·TMPRSS2基因的PCR扩增 | 第24页 |
| ·重组逆转录病毒质粒pLXSN-TMPRSS2的构建 | 第24-25页 |
| ·重组质粒及辅助质粒pGP和pE-ampho的准备 | 第25页 |
| ·转染293T细胞包装逆转录病毒颗粒 | 第25-26页 |
| ·逆转录病毒颗粒感染MDCK细胞 | 第26页 |
| ·MDCK-TMPRSS2细胞系DNA的PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·MDCK-TMPRSS2细胞系RNA的RT-PCR鉴定 | 第27页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)鉴定TMPRSS2基因的表达 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-31页 |
| 2 .2.1 PCR扩增结果 | 第27-28页 |
| ·重组逆转录病毒质粒pLXSN-TMPRSS2酶切鉴定 | 第28页 |
| ·逆转录病毒颗粒的包装 | 第28-29页 |
| ·G418抗性细胞的筛选 | 第29页 |
| ·MDCK-TMPRSS2细胞系DNA的PCR鉴定和RNA的RT-PCR鉴定 | 第29-30页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)鉴定TMPRSS2基因的表达 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 流感病毒在MDCK-TMPRSS2细胞系上增殖特性研究 | 第33-38页 |
| ·材料和方法 | 第33-34页 |
| ·病毒株和试剂 | 第33页 |
| ·流感病毒感染MDCK-TMPRSS2细胞后细胞病变效应(CPE)观察 | 第33页 |
| ·IFA检测流感病毒在MDCK-TMPRSS2细胞系的增殖能力 | 第33页 |
| ·不同亚型禽流感病毒感染MDCK-TMPRSS2细胞系 | 第33-34页 |
| ·红细胞凝集试验 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-36页 |
| ·流感病毒感染MDCK-TMPRSS2细胞后的CPE观察结果 | 第34页 |
| ·IFA检测流感病毒在MDCK-TMPRSS2细胞上增殖能力的结果 | 第34-35页 |
| ·红细胞凝集试验结果 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 全文结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-45页 |
| 附录 | 第45-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简历 | 第49页 |
