| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-14页 |
| 插图和附表清单 | 第14-17页 |
| 英文缩略词表 | 第17-18页 |
| 第一章 引言 | 第18-37页 |
| ·棉铃虫的防治以及抗药性 | 第18-20页 |
| ·P450酶系与昆虫抗药性的研究进展 | 第20-28页 |
| ·P450酶系 | 第20-28页 |
| ·P450酶系与害虫抗药性关系 | 第28页 |
| ·P450酶系的异源表达研究 | 第28-31页 |
| ·大肠杆菌异源表达 | 第29页 |
| ·杆状病毒介导的昆虫细胞异源表达 | 第29-30页 |
| ·毕赤酵母异源表达 | 第30-31页 |
| ·γ-氨基丁酸与GABA受体 | 第31-32页 |
| ·γ-氨基丁酸及其作用 | 第31页 |
| ·GABA受体的分类、组成及其作用 | 第31-32页 |
| ·GABA受体与药物的作用 | 第32-33页 |
| ·本研究的目的、意义、主要内容和技术路线 | 第33-37页 |
| ·研究目的和意义 | 第33-34页 |
| ·主要研究内容 | 第34页 |
| ·技术路线 | 第34-37页 |
| 第二章 棉铃虫细胞色素b_5还原酶基因的克隆与生物信息学分析 | 第37-60页 |
| ·材料与方法 | 第37-50页 |
| ·供试材料 | 第37-38页 |
| ·主要生化试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38-41页 |
| ·实验方法 | 第41-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-58页 |
| ·HDFR品系和HDS品系棉铃虫总RNA的提取 | 第50页 |
| ·棉铃虫CBR基因中间片段、3'-RACE和5'-RACE的克隆与分析 | 第50-52页 |
| ·HDFR品系棉铃虫CBR基因的全长拼接 | 第52-53页 |
| ·棉铃虫CBR基因全长的核苷酸序列分析 | 第53-54页 |
| ·棉铃虫CBR蛋白的氨基酸序列分析 | 第54-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第三章 棉铃虫细胞色素P450还原酶基因克隆与生物信息学分析 | 第60-79页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·供试材料 | 第60页 |
| ·主要生化试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器设备 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-77页 |
| ·棉铃虫CPR基因中间片段、3'-RACE和5'-RACE的克隆与分析 | 第63-66页 |
| ·HDFR品系棉铃虫CPR基因的全长拼接 | 第66页 |
| ·HDS和HDFR品系棉铃虫CPR基因ORF的克隆和序列对比 | 第66-67页 |
| ·棉铃虫CPR基因全长的核苷酸序列分析 | 第67-71页 |
| ·棉铃虫CPR蛋白的氨基酸序列分析 | 第71-74页 |
| ·棉铃虫CPR蛋白三级结构预测 | 第74-75页 |
| ·棉铃虫CPR基因系统发育树的构建 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第四章 CPR和CBR基因在棉铃虫体内的时空及诱导表达研究 | 第79-91页 |
| ·材料与方法 | 第79-82页 |
| ·供试昆虫 | 第79页 |
| ·PB人工饲料的配制以及试虫的处理 | 第79页 |
| ·主要仪器 | 第79-80页 |
| ·主要生化试剂 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-89页 |
| ·荧光定量PCR扩增目的基因的引物特异性检测 | 第82页 |
| ·荧光定量PCR扩增目的基因的标准曲线和溶解曲线 | 第82-85页 |
| ·棉铃虫CPR mRNA在不同生长阶段和组织内的表达 | 第85-86页 |
| ·棉铃虫CBR mRNA在不同生长阶段和组织内的表达 | 第86-88页 |
| ·HDS品系棉铃虫CPR和CBR mRNA在PB诱导后的表达量变化 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-91页 |
| 第五章 棉铃虫CPR基因和CYP6B7基因在酵母内的异源共表达 | 第91-119页 |
| ·材料与方法 | 第91-108页 |
| ·实验材料 | 第91页 |
| ·试剂及培养基 | 第91页 |
| ·培养基和主要化学试剂溶液的配制 | 第91-96页 |
| ·主要仪器设备 | 第96页 |
| ·实验方法 | 第96-108页 |
| ·结果与分析 | 第108-117页 |
| ·加酶切位点的CPR和CYP6B7基因片段的扩增结果 | 第108-111页 |
| ·双酶切目的基因片段 | 第111-112页 |
| ·表达载体M-pPICZA-CPR-CYP6B7的构建和验证 | 第112-113页 |
| ·电转化表达载体pPICZA-CPR,M-pPICZA-CYP6B7,M-pPICZA-CPR-CYP6B7和空载体pPICZA至毕赤酵母 | 第113页 |
| ·MM和MD培养基筛选不同基因型的表达菌株 | 第113-114页 |
| ·重组酵母的基因组PCR鉴定 | 第114-115页 |
| ·SDS-PAGE检测毕赤酵母的诱导表达 | 第115-117页 |
| ·Western blotting检测毕赤酵母的诱导表达 | 第117页 |
| ·讨论 | 第117-119页 |
| 第六章 异恶唑类衍生物对GABA受体结合作用的影响 | 第119-133页 |
| ·材料与方法 | 第119-125页 |
| ·供试样品来源 | 第119页 |
| ·仪器设备 | 第119-120页 |
| ·供试化合物及其工作液的配制 | 第120-121页 |
| ·缓冲液的配制 | 第121-122页 |
| ·家蝇头部膜蛋白溶液的制备 | 第122-123页 |
| ·蜜蜂头部膜蛋白溶液的制备 | 第123页 |
| ·大鼠脑膜蛋白溶液的制备 | 第123页 |
| ·重组的人GABA_A受体β_3亚基的表达 | 第123-124页 |
| ·放射性配基结合试验 | 第124页 |
| ·毒力测定实验 | 第124页 |
| ·数据处理 | 第124-125页 |
| ·结果与分析 | 第125-131页 |
| ·放射性配基[~3H]fluralaner结合实验 | 第125-126页 |
| ·四种拮抗剂对[~3H]fluralaner、[~3H]EBOB和[~3H]AVE结合作用的影响 | 第126-127页 |
| ·异恶唑类衍生物抑制作用与放射性配基[~3H]fluralaner、[~3H]EBOB和[~3H]AVE与膜蛋白结合反应之间的关联性 | 第127-128页 |
| ·异恶唑类衍生物对四种昆虫毒力表征指数与放射性配基结合作用之间的关系 | 第128-131页 |
| ·三种化合物对[~3H]EBOB与哺乳动物受体结合作用的影响 | 第131页 |
| ·讨论 | 第131-133页 |
| 第七章 毒鼠强等不同化合物对GABA受体结合作用的影响 | 第133-143页 |
| ·材料与方法 | 第133-135页 |
| ·供试样品来源 | 第133页 |
| ·大鼠脑膜蛋白溶液的制备 | 第133页 |
| ·大鼠脑膜蛋白与放射性配基结合实验 | 第133-135页 |
| ·数据处理 | 第135页 |
| ·结果与分析 | 第135-142页 |
| ·放射性配基[~(14)C]TETS与大鼠脑膜蛋白的结合作用 | 第135页 |
| ·惊厥剂、杀虫剂和抗惊厥剂等与放射性配基的竞争性结合作用 | 第135-138页 |
| ·A类型与B类型化合物作用方式与结合位置的关系 | 第138-139页 |
| ·毒鼠强的解毒剂 | 第139-142页 |
| ·讨论 | 第142-143页 |
| 第八章 结论 | 第143-145页 |
| ·棉铃虫细胞色素b_5还原酶基因的克隆和生物信息学分析 | 第143页 |
| ·棉铃虫细胞色素P450还原酶基因的克隆和生物信息学分析 | 第143页 |
| ·RT-qPCR检测棉铃虫细胞色素P450和b_5还原酶基因的时空和诱导表达 | 第143-144页 |
| ·棉铃虫细胞色素P450还原酶基因与CYP6B7基因在毕赤酵母内的表达和鉴定 | 第144页 |
| ·异恶唑类衍生物对于不同物种GABA受体结合作用的影响 | 第144页 |
| ·毒鼠强等化合物对于大鼠脑膜蛋白结合作用的影响 | 第144-145页 |
| 第九章 本研究的创新点及展望 | 第145-146页 |
| ·本研究的创新点 | 第145页 |
| ·展望 | 第145-146页 |
| 参考文献 | 第146-163页 |
| 致谢 | 第163-164页 |
| 作者简介 | 第164-165页 |
