| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-47页 |
| 第一节 几丁质酶及其应用 | 第17-20页 |
| ·几丁质 | 第17-18页 |
| ·几丁质酶 | 第18-19页 |
| ·几丁质酶的应用 | 第19-20页 |
| 第二节 细菌几丁质酶及其基因 | 第20-24页 |
| ·产几丁质酶的细菌种类 | 第20-21页 |
| ·细菌几丁质酶 | 第21-22页 |
| ·细菌几丁质酶基因 | 第22-24页 |
| 第三节 细菌几丁质酶基因的表达调控 | 第24-34页 |
| ·细菌中几丁质水解产物转运系统及其调控 | 第24-29页 |
| ·细菌 chi 基因调控序列的分子特征 | 第29-30页 |
| ·细菌 chi 基因的调控蛋白及双组份调节系统 | 第30-34页 |
| 第四节 细菌基因转录调控研究的一般方法 | 第34-35页 |
| ·转录融合方法 | 第34页 |
| ·常用的报告基因 | 第34-35页 |
| ·启动子探测型载体 | 第35页 |
| 第五节 苏云金芽胞杆菌几丁质酶及其基因的研究 | 第35-45页 |
| ·苏云金芽胞杆菌简介 | 第35-36页 |
| ·苏云金芽胞杆菌几丁质酶 | 第36-41页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 chi 基因 | 第41-43页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 chi 基因的表达调控 | 第43-45页 |
| 第六节 研究的目的、意义及其主要研究内容 | 第45-47页 |
| ·目的和意义 | 第45页 |
| ·研究内容 | 第45-47页 |
| 第二章 Bt 几丁质酶合成调节的多态现象 | 第47-69页 |
| 第一节 实验材料、仪器和试剂 | 第47-50页 |
| ·菌株和质粒 | 第47-48页 |
| ·培养基（g/L） | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| ·主要试剂、酶和试剂盒 | 第49-50页 |
| 第二节 实验方法 | 第50-56页 |
| ·胶体几丁质的制备 | 第50-51页 |
| ·几丁质酶活力的测定 | 第51页 |
| ·Bt 几丁质酶基因诱导表达类型的调查 | 第51-52页 |
| ·葡萄糖对几丁质酶活力影响的测定 | 第52页 |
| ·Bt 菌 total DNA 的提取 | 第52页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第52-53页 |
| ·Bt 几丁质酶基因的克隆 | 第53-55页 |
| ·转化子的验证 | 第55-56页 |
| ·DNA 序列的测定与分析 | 第56页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第56-67页 |
| ·77 株 Bt 在有或无诱导物培养时几丁质酶活力调查 | 第56-59页 |
| ·诱导前后 77 株 Bt 菌几丁质酶活力的分布统计 | 第59-60页 |
| ·几丁质诱导效率的统计分析 | 第60-61页 |
| ·葡萄糖对 Bt 几丁质酶表达的影响 | 第61-63页 |
| ·不同表达类型菌株 chi 基因调节区域差异分析 | 第63-67页 |
| 第四节 本章小结 | 第67-69页 |
| 第三章 芽胞杆菌基因启动子探测型载体的构建 | 第69-84页 |
| 第一节 实验材料、仪器和试剂 | 第69-72页 |
| ·菌株和质粒 | 第69-70页 |
| ·培养基（g/L） | 第70页 |
| ·主要仪器 | 第70-71页 |
| ·主要试剂、酶和试剂盒 | 第71-72页 |
| 第二节 实验方法 | 第72-75页 |
| ·PCR 扩增 | 第72-73页 |
| ·感受态细胞的制备和电转化 | 第73页 |
| ·菌体 DNA 模板的制作 | 第73-74页 |
| ·β-半乳糖苷酶酶活力测定 | 第74页 |
| ·DNA 片段酶切、纯化回收及连接 | 第74-75页 |
| ·其它实验方法 | 第75页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第75-83页 |
| ·启动子探测型穿梭载体 pCB 的构建策略 | 第75-77页 |
| ·pMD19-bgaB 载体的构建 | 第77-78页 |
| ·pHT-bgaB 载体的构建 | 第78-79页 |
| ·pHT-bgaB 载体特性的验证 | 第79-80页 |
| ·载体 pCB 的构建及酶切位点验证 | 第80-82页 |
| ·pCB 载体期待特性的验证 | 第82-83页 |
| 第四节 本章小结 | 第83-84页 |
| 第四章 chiA 基因调控元件的鉴定和功能分析 | 第84-115页 |
| 第一节 实验材料、仪器和试剂 | 第84-89页 |
| ·菌株和质粒 | 第84-86页 |
| ·培养基 | 第86页 |
| ·主要仪器设备 | 第86页 |
| ·试剂、酶及试剂盒 | 第86-89页 |
| 第二节 实验方法 | 第89-93页 |
| ·PCR 扩增 | 第89页 |
| ·DNA 片段酶切、纯化回收及连接 | 第89-91页 |
| ·Bt75(pCB-75A)生长曲线及酶活动力曲线的绘制 | 第91页 |
| ·检测几丁单糖（GlcNAc）对 chiA 启动子活性的影响 | 第91页 |
| ·5′RACE 方法确定 chiA 转录起始位点 | 第91-93页 |
| ·DNA 序列的测定与分析 | 第93页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第93-114页 |
| ·重组载体 pCB-75A 的构建 | 第93-96页 |
| ·原始菌株 Bt75 中 chiA 启动子的活性检测 | 第96-100页 |
| ·chiA 启动子区域缺失及重要功能区域分析 | 第100-106页 |
| ·chiA 基因转录起始位点的确定 | 第106-112页 |
| ·chiA 调空序列中遗传元件及调控模式分析 | 第112-114页 |
| 第四节 本章小结 | 第114-115页 |
| 第五章 chiB 基因调控元件的鉴定和功能分析 | 第115-156页 |
| 第一节 实验材料、仪器和试剂 | 第115-123页 |
| ·菌株和质粒 | 第115-118页 |
| ·培养基 | 第118页 |
| ·主要仪器设备 | 第118页 |
| ·试剂、酶及试剂盒 | 第118-123页 |
| 第二节 实验方法 | 第123-129页 |
| ·PCR 扩增 | 第123页 |
| ·Bt75(pCB-75B)生长曲线及酶活动力曲线的绘制 | 第123-124页 |
| ·检测几丁单糖（GlcNAc）对 chiB 启动子活性的影响 | 第124页 |
| ·Northern 印迹分析 | 第124-126页 |
| ·凝胶电泳迁移率变动分析 | 第126-129页 |
| ·DNA 序列的测定与分析 | 第129页 |
| ·利用 5′RACE 方法确定 chiB 转录起始位点 | 第129页 |
| ·其它实验方法 | 第129页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第129-154页 |
| ·重组载体 pCB-75B 的构建 | 第129-132页 |
| ·chiB 启动子在 Bt75 中表达特性的研究 | 第132-135页 |
| ·chiB 启动子区域缺失及重要功能区域分析 | 第135-144页 |
| ·dre 中关键碱基决定 chiB 基因表达类型 | 第144-148页 |
| ·chiB 基因转录起始位点的确定 | 第148-153页 |
| ·chiB 调空序列中遗传元件及调控模式分析 | 第153-154页 |
| 第四节 本章小结 | 第154-156页 |
| 第六章 结论、创新点与展望 | 第156-160页 |
| 第一节 研究结论 | 第156-157页 |
| ·Bt 菌在几丁质酶合成的调节方式上具有多态性 | 第156页 |
| ·成功构建一个启动子探测型穿梭载体 pCB | 第156页 |
| ·确定 chiA 调控序列中的核心启动子等多个调控元件 | 第156页 |
| ·确定 chiB 调控序列中的 dre 位点等多个调控元件 | 第156-157页 |
| ·确定了 chiA、chiB 基因表达的时段 | 第157页 |
| ·证明几丁单糖不是 chiA、chiB 基因的有效诱导物 | 第157页 |
| 第二节 创新点 | 第157-158页 |
| 第三节 研究展望 | 第158-160页 |
| ·Bt 几丁质酶基因中应答诱导调控位点的精确定位 | 第158页 |
| ·应答诱导的负调控位点中关键碱基的确定 | 第158页 |
| ·Bt 中几丁质酶基因调控因子的寻找 | 第158-159页 |
| ·Bt 几丁质酶基因应答分解代谢调控蛋白机理的研究 | 第159页 |
| ·Bt 几丁质酶基因表达调控机制的确定 | 第159-160页 |
| 参考文献 | 第160-171页 |
| 致谢 | 第171-172页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第172-174页 |
