| 符号说明 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 1 前言 | 第17-46页 |
| ·植物萜类物质的重要作用 | 第17-19页 |
| ·植物萜类物质的合成途径 | 第19-27页 |
| ·IPP 和 DMAPP 的形成 | 第19-21页 |
| ·形成异戊烯基焦磷酸前体 | 第21-26页 |
| ·形成萜类物质 | 第26-27页 |
| ·植物萜烯合酶研究进展 | 第27-28页 |
| ·萜类代谢工程对植物生物学特性的影响 | 第28-30页 |
| ·α-法尼烯及α-法尼烯合酶研究进展 | 第30-31页 |
| ·启动子概述 | 第31-41页 |
| ·启动子的种类 | 第32-36页 |
| ·组成型启动子 | 第32-33页 |
| ·组织特异型启动子 | 第33-34页 |
| ·诱导型启动子 | 第34-36页 |
| ·启动子分离的方法 | 第36-41页 |
| ·利用启动子探针载体筛选启动子 | 第36页 |
| ·利用 PCR 技术克隆启动子 | 第36-37页 |
| ·环状 PCR | 第37-38页 |
| ·利用载体或接头的染色体步移技术克隆基因启动子 | 第38-39页 |
| ·YADE 法 | 第39页 |
| ·TAlL-PCR | 第39-41页 |
| ·启动子的研究方法 | 第41-44页 |
| ·生物信息学方法 | 第41-43页 |
| ·实验方法功能分析 | 第43-44页 |
| ·瞬间表达分析 | 第43页 |
| ·稳定表达分析 | 第43-44页 |
| ·突变分析 | 第44页 |
| ·本研究的目的意义 | 第44-46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-70页 |
| ·实验材料 | 第46-48页 |
| ·植物材料 | 第46页 |
| ·菌株与质粒 | 第46页 |
| ·酶及生化试剂 | 第46页 |
| ·PCR 引物 | 第46-48页 |
| ·实验方法 | 第48-70页 |
| ·过表达α-AFS 转基因烟草植株生长特性分析 | 第48-50页 |
| ·转基因烟草植株生长量的测定 | 第48-49页 |
| ·激素的测定 | 第49-50页 |
| ·总 RNA 提取 | 第50-51页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第51-52页 |
| ·实时荧光定量 PCR（qPCR） | 第52-53页 |
| ·激素处理 | 第53页 |
| ·转基因烟草萜类物质与类固醇的测定 | 第53-55页 |
| ·转基因烟草萜类物质的测定 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草类固醇的测定 | 第54-55页 |
| ·转基因烟草生物碱含量的测定 | 第55页 |
| ·转基因烟草光合色素含量的测定 | 第55页 |
| ·转基因植株抗逆生理指标测定 | 第55-57页 |
| ·烟草种子萌发实验及幼苗生长实验 | 第55-56页 |
| ·转基因烟草抗氧化能力测定 | 第56页 |
| ·相对电导率的测定 | 第56页 |
| ·烟草植株光合指标和叶绿素荧光参数测定 | 第56-57页 |
| ·苹果α-AFS 基因多态性分析 | 第57-58页 |
| ·CTAB 法提取苹果果皮总 RNA | 第57-58页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第58页 |
| ·红星苹果和皇家嘎啦苹果α-AFS 基因全长扩增 | 第58页 |
| ·苹果α-法尼烯合酶基因启动子分离 | 第58-65页 |
| ·苹果基因组 DNA 的提取 | 第58-59页 |
| ·TAIL-PCR 法克隆α-AFS 基因启动子 | 第59-60页 |
| ·α-AFS 基因启动区序列验证与克隆 | 第60页 |
| ·α-AFS 基因启动子 pAFSX-GUS 表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·连接 | 第61-62页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第62页 |
| ·转化及克隆筛选、测序 | 第62页 |
| ·碱法小量提取质粒 DNA | 第62-63页 |
| ·pMD18-T simple 质粒 DNA 和 pCAMBIA1391 载体的酶切 | 第63页 |
| ·回收 | 第63页 |
| ·载体构建 | 第63-64页 |
| ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备 | 第64页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第64页 |
| ·利用农杆菌介导转化烟草 | 第64-65页 |
| ·转基因烟草植株检测 | 第65-70页 |
| ·CTAB 法微量提取基因组 DNA | 第65-66页 |
| ·转基因植株的 PCR 筛选 | 第66页 |
| ·转基因植株的 GUS 染色 | 第66-67页 |
| ·GUS 活性的荧光检测 | 第67-70页 |
| 3 结果与分析 | 第70-108页 |
| ·转α-AFS 基因烟草生长发育特性及分子基础 | 第70-90页 |
| ·转基因植株和野生型植株的表型分析 | 第70-72页 |
| ·α-AFS 基因在烟草中过表达对激素含量影响 | 第72-74页 |
| ·α-AFS 基因在烟草中过表达对细胞色素与生物碱含量影响 | 第74-75页 |
| ·α-AFS 基因在烟草中过表达对 NtHMGR2、NtFPS 和 NtDXS、NtDXR 表达的影响 | 第75-76页 |
| ·叶片中 GAs 合成代谢相关基因表达分析 | 第76-78页 |
| ·开花分子标记基因表达分析 | 第78-79页 |
| ·GA3和 PCB 处理对 GAs 代谢基因表达的影响 | 第79-82页 |
| ·转基因烟草挥发物检测 | 第82-84页 |
| ·转基因烟草总固醇含量检测 | 第84-86页 |
| ·转基因烟草植株抗氧化能力检测 | 第86-88页 |
| ·转基因烟草植株抗氯化钠胁迫检测 | 第88页 |
| ·高温处理对转基因烟草光合、荧光参数和相对电导率的影响 | 第88-90页 |
| ·α-法尼烯合酶基因启动子克隆及功能分析 | 第90-108页 |
| ·α-法尼烯合酶基因多态性分析 | 第90-92页 |
| ·α-AFS 基因启动子的分离及其特征分析 | 第92-108页 |
| ·α-AFS 基因启动子的分离 | 第92-95页 |
| ·α-AFS 基因启动子序列特征分析 | 第95-97页 |
| ·启动子序列系列删除表达载体构建及遗传转化 | 第97-102页 |
| ·转基因烟草植株鉴定及 GUS 活性分析 | 第102-108页 |
| 4 讨论 | 第108-113页 |
| 5 结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
