| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一部分 引言 | 第11-19页 |
| 1 猪圆环病毒（PCV）的概述 | 第11-15页 |
| ·PCV的分类地位 | 第11页 |
| ·理化特性 | 第11-12页 |
| ·细胞培养特性 | 第12页 |
| ·病毒组成与功能 | 第12-13页 |
| ·病毒的复制 | 第13-14页 |
| ·致病机理 | 第14页 |
| ·流行病学 | 第14-15页 |
| 2 PCV2 的诊断方法 | 第15-16页 |
| ·病毒分离及与鉴定 | 第15页 |
| ·PCR方法 | 第15页 |
| ·间接免疫荧光试验（IFA） | 第15页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第15-16页 |
| 3 PCV2 疫苗的研究现状 | 第16-17页 |
| 4 预防措施 | 第17页 |
| 5.本文研究的目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二部分 PCV2 与 PCV2-C 弱毒株的构建及细胞水平检测 | 第19-39页 |
| 1.实验材料 | 第19-21页 |
| ·病料和宿主菌 | 第19页 |
| ·质粒载体 | 第19页 |
| ·工具酶和主要商品试剂 | 第19页 |
| ·培养基和试剂配制 | 第19-21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| 2.实验方法 | 第21-31页 |
| ·PET30a-PCV2 的克隆构建 | 第21-26页 |
| ·PCV2 DNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·PCV2 全基因扩增 | 第22-23页 |
| ·PCV2-PCR 纯化回收 | 第23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·抽提空载体质粒 pET-30a | 第24页 |
| ·空载体质粒 pET-30a 酶切 | 第24-25页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第25页 |
| ·PCV2 基因片段与 pET-30a 载体连接 | 第25页 |
| ·连接产物转化 | 第25-26页 |
| ·阳性重组菌筛选鉴定 | 第26页 |
| ·阳性重组质粒酶切鉴定 | 第26页 |
| ·pET30a-PCV2 阳性重组质粒测序 | 第26页 |
| ·pET30a-PCV2-C 的构建 | 第26-28页 |
| ·PCV2-C 引物的设计 | 第26-27页 |
| ·PCV2-C 片段退火 | 第27页 |
| ·pET30a-PCV2 阳性重组菌抽质粒 | 第27页 |
| ·PCV2-C 退火片段与 pET30a-PCV2 阳性重组质粒酶切 | 第27-28页 |
| ·PCV2-C 退火片段酶切后与 pET30a-PCV2 阳性重组质粒酶切载体连接 | 第28页 |
| ·连接产物转化 | 第28页 |
| ·阳性重组菌筛选鉴定 | 第28页 |
| ·菌落 PCR 筛选 | 第28页 |
| ·pET30a-PCV2-C 阳性重组质粒酶切鉴定 | 第28页 |
| ·pET30a-PCV2-C 阳性重组质粒测序 | 第28页 |
| ·PCV2 与 PCV2-C 自体环化 | 第28-29页 |
| ·pET30a-PCV2 与 pET30a-PCV2-C 菌抽质粒 | 第28页 |
| ·pET30a-PCV2 与 pET30a-PCV2-C 质粒酶切 | 第28页 |
| ·PCV2 与 PCV2-C 目的片段回收 | 第28页 |
| ·PCV2 与 PCV2-C 目的片段自连 | 第28页 |
| ·PCV2 与 PCV2-C 目的片段自连后纯化 | 第28-29页 |
| ·PCV2 与 PCV2-C 目的片段自连纯化后转染 PK-15 细胞 | 第29-31页 |
| ·用紫外吸收法测定自连产物的纯度和浓度 | 第29页 |
| ·无 PCV-1 污染的 PK-15 细胞的复苏 | 第29页 |
| ·转染 PK-15 细胞 | 第29页 |
| ·PCV2 病毒液与 PCV2-C 病毒液连续感染六代 | 第29-30页 |
| ·PCR 检测 | 第30页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-37页 |
| ·PCV2 基因的 PCR 扩增 | 第31页 |
| ·PET30a- PCV2 基因酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·PET30a- PCV2-C 基因的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·PCV2 与 PCV2-C 的测序结果 | 第32-35页 |
| ·PET30a- PCV2 与 PET30a- PCV2-C 基因酶切纯化 | 第35页 |
| ·PCR 检测结果 | 第35-36页 |
| ·间接免疫荧光检测结果 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三部分 猪圆环病毒 2 型 CAP 基因原核表达载体的构建及表达 | 第39-53页 |
| 1 实验材料 | 第39-41页 |
| ·病料和宿主菌 | 第39页 |
| ·质粒载体 | 第39页 |
| ·工具酶和主要商品试剂 | 第39页 |
| ·培养基和主要试剂配制 | 第39-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-47页 |
| ·pET30a-PCV2 原核表达载体的构建 | 第41-45页 |
| ·PCV2-Cap 基因的扩增 | 第41-42页 |
| ·PCR 产物的克隆与序列测定 | 第42页 |
| ·目的片段与 pMD18-T 载体连接 | 第42页 |
| ·连接产物转化 | 第42页 |
| ·克隆筛选 | 第42-43页 |
| ·阳性重组质粒 pMD18-PCV2-Cap 酶切鉴定 | 第43页 |
| ·pET30a-PCV2 阳性重组质粒测序 | 第43页 |
| ·pET30a-PCV2-Cap 重组质粒的构建 | 第43页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第43页 |
| ·目的片段的克隆 | 第43-44页 |
| ·连接产物转化 | 第44页 |
| ·阳性重组菌筛选 | 第44页 |
| ·阳性重组质粒酶切鉴定 | 第44页 |
| ·pET30a-PCV2-Cap 阳性重组质粒测序 | 第44-45页 |
| ·重组菌 pET30a-PCV2-Cap 诱导表达 | 第45-46页 |
| ·重组菌 pET30a-PCV2-Cap 诱导表达条件的优化 | 第45页 |
| ·pET30a-PCV2-Cap 表达蛋白的 SDS-PAGE 电泳 | 第45-46页 |
| ·pET30a-PCV2-Cap 表达蛋白可溶性分析 | 第46页 |
| ·pET30a-PCV2-Cap 表达蛋白的 Western-Blot 分析 | 第46-47页 |
| 3.结果与分析 | 第47-51页 |
| ·PCV2–Cap 基因的 PCR 扩增 | 第47页 |
| ·pMD18-PCV2-Cap 基因克隆筛选与酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·pET30a-PCV2-Cap 原核表达载构建和筛选 | 第48页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE | 第48-49页 |
| ·目的蛋白的可溶性分析 | 第49-50页 |
| ·pET30a-PCV2-Cap 蛋白纯化效果检测及浓度的测定 | 第50页 |
| ·重组蛋白的 Western-Blot 分析 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 硕士期间论文发表情况 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
