| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一部分 PCNP 过表达真核表达载体重组质粒的构建 | 第16-26页 |
| ·前言 | 第16页 |
| ·材料，试剂与仪器 | 第16-17页 |
| ·载体，菌种来源 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-22页 |
| ·引物设计 | 第17页 |
| ·提取细胞总 RNA 及 cDNA 的合成 | 第17-18页 |
| ·PCNP 全长的 PCR 扩增反应 | 第18-19页 |
| ·PCNP 全长基因的回收 | 第19页 |
| ·PCNP 全长基因与真核表达载体的酶切、连接反应 | 第19页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第19-21页 |
| ·转化 | 第21页 |
| ·挑取阳性克隆 | 第21-22页 |
| ·实验结果 | 第22-24页 |
| ·cDNA 内参β-actin 基因片段 | 第22页 |
| ·PCNP 全长基因的扩增 | 第22页 |
| ·PCR 产物与真核表达载体 pcDNA3.1(+)连接的酶切鉴定结果 | 第22-23页 |
| ·全长基因测序鉴定 | 第23-24页 |
| ·讨论 | 第24-26页 |
| 第二部分 PCNP 沉默真核表达载体重组质粒的构建 | 第26-36页 |
| ·前言 | 第26页 |
| ·材料，试剂与仪器 | 第26-27页 |
| ·载体，菌种来源 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·siRNA 设计 | 第27页 |
| ·酶切 pSilence 4.1-CMV neo 载体及其回收 | 第27-28页 |
| ·双链 RNA 合成 | 第28页 |
| ·双酶切连接，鉴定 | 第28-29页 |
| ·制备 E.coli TOP10 感受态细胞 | 第29-30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·挑取阳性克隆 | 第30-31页 |
| ·实验结果 | 第31-33页 |
| ·pS-1 鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·pS-2 鉴定结果 | 第32页 |
| ·pS-3 鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-36页 |
| 第三部分 PCNP 过表达与沉默质粒在 DC2.4 中的表达及其作用 | 第36-54页 |
| ·前言 | 第36页 |
| ·材料 | 第36-40页 |
| ·细胞株及其试剂 | 第36-37页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37-40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-46页 |
| ·细胞培养及转染 | 第40-42页 |
| ·BCA 测定细胞裂解后总蛋白浓度 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第43-45页 |
| ·MTT 法测定细胞生长曲线 | 第45页 |
| ·流式细胞术测定细胞周期 | 第45-46页 |
| ·实验结果 | 第46-50页 |
| ·脂质体 2000 转染 12hr--72hr 后 DC2.4 存活率 | 第46页 |
| ·脂质体 2000 转染 DC2.472hr 后 Western blot 结果 | 第46-47页 |
| ·电击转染 72hr 后 Western blot 结果 | 第47-48页 |
| ·PCNP 沉默真核表达质粒电转 DC2.4 灰度分析 | 第48页 |
| ·EGFP 质粒电击转染 DC2.4 | 第48-49页 |
| ·MTT 生长曲线 | 第49页 |
| ·流式细胞仪测定细胞周期结果 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-54页 |
| 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 文献综述 | 第58-68页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 在读期间发表的学术论文与研究成果 | 第70-71页 |
