| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| ·植物耐盐机制研究现状 | 第11-15页 |
| ·渗透胁迫抗性 | 第12-14页 |
| ·Na~+地上部分的积累 | 第14页 |
| ·组织对盐的耐受性 | 第14-15页 |
| ·液泡膜质子焦磷酸酶的研究现状 | 第15-16页 |
| ·小拟南芥的研究现状 | 第16页 |
| ·本课题研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 第二章 小拟南芥液泡膜 H~+-PPase 基因 OpVP 的克隆和生物信息学分析 | 第17-30页 |
| ·材料与试剂 | 第17-18页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·菌株及质粒 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·试剂及培养基的配制 | 第17-18页 |
| ·实验仪器 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-24页 |
| ·种子处理 | 第18页 |
| ·种子萌发 | 第18页 |
| ·材料的收集 | 第18页 |
| ·RNA 的提取和 cDNA 的合成 | 第18-19页 |
| ·引物的设计及合成 | 第19-20页 |
| ·基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·PCR 扩增产物的回收 | 第21页 |
| ·回收产物连接 pMD18-T Vecter | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第21页 |
| ·热击转化 | 第21-22页 |
| ·质粒 DNA 的小量提取 | 第22页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第22页 |
| ·序列分析和进化树构建 | 第22页 |
| ·表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·农杆菌转化 | 第23页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-29页 |
| ·基因的克隆与测序 | 第24-26页 |
| ·OpVP 的序列特征分析 | 第26-27页 |
| ·OpVP 蛋白系统进化树分析 | 第27-28页 |
| ·表达载体的构建及农杆菌转化 | 第28-29页 |
| ·结论 | 第29-30页 |
| 第三章 液泡膜质子焦磷酸酶基因 OpVP 的表达分析 | 第30-37页 |
| ·材料和试剂 | 第30-31页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-34页 |
| ·种子处理及萌发 | 第31页 |
| ·材料收集 | 第31-32页 |
| ·RNA 的提取和 cDNA 的合成 | 第32页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测 OpVP 基因的表达 | 第32-33页 |
| ·qRT-PCR 分析 OpVP 基因的表达 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-36页 |
| ·提取小拟南芥的 RNA | 第34页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测 OpVP 基因的表达 | 第34-35页 |
| ·qRT-PCR 分析 OpVP 基因的表达 | 第35-36页 |
| ·结论 | 第36-37页 |
| 第四章 转基因研究 | 第37-46页 |
| ·材料与试剂 | 第37-38页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·烟草 RNA 提取试剂的配制 | 第37页 |
| ·培养基、溶液 | 第37-38页 |
| ·引物合成 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-41页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第38页 |
| ·野生烟草的组织培养和遗传转化 | 第38-39页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第39页 |
| ·转基因植物的基因表达分析 | 第39-40页 |
| ·转基因植株的耐盐性分析 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-45页 |
| ·OpVP 蛋白的亚细胞定位 | 第41页 |
| ·转基因烟草植株的筛选及 PCR 检测 | 第41-42页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测 OpVP 基因的表达 | 第42页 |
| ·转基因植株的耐盐性分析 | 第42-45页 |
| ·结论 | 第45-46页 |
| 第五章 结果与讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55-56页 |
| 导师评阅表 | 第56页 |
